南京大學(xué)模式動(dòng)物所證實(shí)猴子種系獲得Cas9/RNA介導(dǎo)
的基因修飾

2015年01月12日 瀏覽量： 37 次 評(píng)論(0) 來(lái)源：南京大學(xué)模式動(dòng)物研究所 作者：南京大學(xué)模式動(dòng)物研究所責(zé)任編輯：wlladmin

摘要：南京大學(xué)模式動(dòng)物研究所的黃行許(Xingxu Huang)博士、南京醫(yī)科大學(xué)的沙家豪(Jiahao Sha)教授，以及云南省靈長(zhǎng)類生物醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室季維智( Weizhi Ji )等研究人員，在2014年12月23日的《細(xì)胞研究》（Cell Research）雜志上發(fā)表Letter文章稱，繼今年他們成功地利用CRISPR/Cas9系統(tǒng)對(duì)孿生食蟹猴進(jìn)行基因組修飾后，在后續(xù)的研究中他們進(jìn)一步證實(shí)了猴子生殖系細(xì)胞獲得了Cas9/RNA介導(dǎo)的基因修飾。

南京大學(xué)模式動(dòng)物研究所的黃行許(Xingxu Huang)博士、南京醫(yī)科大學(xué)的沙家豪(Jiahao Sha)教授，以及云南省靈長(zhǎng)類生物醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室季維智( Weizhi Ji )等研究人員，在2014年12月23日的《細(xì)胞研究》（Cell Research）雜志上發(fā)表Letter文章稱，繼今年他們成功地利用CRISPR/Cas9系統(tǒng)對(duì)孿生食蟹猴進(jìn)行基因組修飾后，在后續(xù)的研究中他們進(jìn)一步證實(shí)了猴子生殖系細(xì)胞獲得了Cas9/RNA介導(dǎo)的基因修飾。

在猴子中實(shí)現(xiàn)基因打靶將大大的推進(jìn)人類疾病模型的發(fā)展。盡管少量的猴子模型已經(jīng)順利產(chǎn)生，但是大多數(shù)過(guò)去使用靈長(zhǎng)類做基因打靶的努力都不幸失敗了?？芍匦戮幊痰膬?nèi)切核酸酶的方法，例如ZFN（鋅指核酸酶）、TALEN（轉(zhuǎn)錄激活樣效應(yīng)因子核酸酶）和CRISPR（成簇的規(guī)律間隔性短回文重復(fù)序列）/Cas系統(tǒng)為在猴子中實(shí)現(xiàn)基因修飾開(kāi)啟了新途徑。在以上的方法中，CRISPR/Cas9系統(tǒng)被認(rèn)為是zui有效的基因打靶方法，其已成功應(yīng)用于多種動(dòng)物物種中。

他們zui近的研究報(bào)告稱已在猴子上成功利用CRISPR/Cas9在猴子中介導(dǎo)了的基因打靶，Cas9核酸酶利用一個(gè)小型的導(dǎo)向RMA通過(guò)堿基配對(duì)被定向到一個(gè)特殊的基因位點(diǎn)。通過(guò)顯微注射cas9 mRNA和靶向 3種sgRNAs基因NR0B1（細(xì)胞核受體亞科0 b組成員1）、PPAR-γ（過(guò)氧化物酶體增殖物活性受體γ）、和RAG1（重組活化基因1）進(jìn)入單細(xì)胞胚胎，他們?cè)?9只代孕食蟹猴中建立了10例妊娠。*組足月孿生猴被證實(shí)攜帶了Ppar-γ和Rag1靶基因突變，并且未檢測(cè)到任何的脫靶效應(yīng)。隨后他們利用TALEN也在猴子中成功進(jìn)行了基因組操控。這些成果證明了在猴子中實(shí)現(xiàn)基因打靶的可行性。

然而，要建立遺傳上的改良猴子種群基因修飾的種系傳遞*。盡管以往有研究報(bào)告稱在猴子中成功實(shí)現(xiàn)了轉(zhuǎn)基因的種系傳遞，但對(duì)于CRISPR/Cas9在猴子中介導(dǎo)的基因組編輯能否傳遞至下一代仍有待確定。在這項(xiàng)研究中，他們著手檢測(cè)性腺和生殖細(xì)胞的基因靶效應(yīng)從而探索種系傳遞是否可能在Cas9處理的猴子中發(fā)生。
  在這篇文章中作者們報(bào)告稱，他們?cè)诤罄m(xù)的研究中進(jìn)一步證實(shí)了利用CRISPR/Cas9系統(tǒng)在猴子中實(shí)現(xiàn)基因編輯的可行性。此外，他們的數(shù)據(jù)證實(shí)了Cas9介導(dǎo)的誘變廣泛存在于各種體細(xì)胞組織和生殖腺中。更為重要的是，他們的研究在群體和單細(xì)胞水平上提供了重要的證據(jù)證實(shí)，Cas9介導(dǎo)的基因修飾存在于猴子的生殖系細(xì)胞中，且這些修飾極有可能通過(guò)猴子的生殖系細(xì)胞傳遞給下一代。雖然如此，作者們表示有關(guān)種系傳遞的直接證據(jù)還有待進(jìn)一步獲取。

此文轉(zhuǎn)發(fā)自：中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物信息網(wǎng) 

來(lái)源：南京大學(xué)模式動(dòng)物研究所 作者：南京大學(xué)模式動(dòng)物研究所