化工儀器網(wǎng)
技術(shù)文章
人elisa試劑盒樣本操作及原理
閱讀：558 發(fā)布時間：2019-5-10人elisa試劑盒樣本操作及原理
人elisa試劑盒組織樣本的處理：
用預(yù)冷的PBS (0.01M,pH=7.4)沖洗組織，以去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結(jié)果），稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣本對應(yīng)9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實驗需要適當(dāng)調(diào)整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞，可以對勻漿液進行超聲破碎，或反復(fù)凍融。zui后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測。
關(guān)于人elisa試劑盒的固相載體原理：
一、良好的ELISA板應(yīng)該是吸附機能好，空缺值低。
二、為比較不同固相在某一ELISA測定中的優(yōu)劣，可應(yīng)用如下的試驗：用其他免疫學(xué)測定方法選出一個典型的陽性標(biāo)本和陰性標(biāo)本，將它們進行一系列稀釋后，在不同的固相載體上按預(yù)定的ELISA操縱步驟進行測定，然后比較結(jié)果?？勺鱁LISA中載體的材料良多，zui常用的是聚苯乙烯。在ELISA試劑盒中用作固相載體的小珠一般為直徑0.6cm的圓珠，表面經(jīng)磨砂處理后吸附面積大大增加。
三、與聚苯乙烯類似的塑料是聚氯乙烯。人ELISA試劑盒所有單個讀數(shù)與全部讀數(shù)的均數(shù)之差，應(yīng)小于10%。其長處是表面積極大，反應(yīng)在懸液中進行，其速率與液相反應(yīng)近似。
在哪一種載體上陽性結(jié)果與陰性結(jié)果差別zui大，這種載體就是這一ELISA測定項目的zui合適的固相載體。小珠的另一特點是更易于使洗滌*，使用特殊的洗滌器，使小珠在洗滌過程中動彈淋洗，其洗滌效果遠較板孔的浸泡式為好。ELISA試劑盒常用的檢查方法為：以一定濃度的人IgG（一般為10ng/ml）包被ELISA板各孔，洗滌后每孔內(nèi)加入適當(dāng)稀釋度的酶標(biāo)抗人IgG抗體，保溫后洗滌，加底物顯色，終止酶反應(yīng)后，分別測每孔溶液的吸光度。以含鐵的磁性微粒作為ELISA固相載體，反應(yīng)后用磁鐵的吸引進行分離，洗滌利便，試劑盒一般均配以特殊儀器。
四、為便于作少量標(biāo)本的檢測，有制成8聯(lián)孔條或12聯(lián)孔條的，放入座架后，大小與尺度ELISA板相同。聚苯乙烯ELISA板因為原料的不同和制作工藝的差別，各種產(chǎn)品的質(zhì)量差異很大，因此，每一批號的ELISA板在使用前須事先檢查其機能。