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技術文章

大鼠ELISA試劑盒樣品制備方法

閱讀:273          發(fā)布時間:2020-8-3

 

一、細胞培養(yǎng)物上清液

1.將細胞培養(yǎng)上清移至離心管,4℃,1,500 rpm 離心 10 分鐘。

 2.立即進行上清液的分裝并于 -80℃ 保存。避免反復凍融。

 二、細胞提取物

1.將細胞培養(yǎng)板放置在冰上。

2.吸出培養(yǎng)基并用預冷 PBS 輕輕漂洗細胞一次。

3.棄去 PBS ,向 100 mm 培養(yǎng)板加入 0.5ml 提取緩沖液。

4.收集細胞,然后移至經過預冷的離心管中。

5.短暫渦旋后冰上孵育 15-30 分鐘

6.4℃ 13,000  rpm 離心 10 分鐘,沉淀不溶性內容物。

7.將上清(這里是指可溶性細胞提取物)分裝至預冷的離心管中,并于 -80℃ 保存。盡可能減少反復凍融次數。

三、條件培養(yǎng)基

1.將細胞接種到含*(含血清)生長培養(yǎng)基的培養(yǎng)容器中,使細胞增殖達到預期的融合度。

2.棄去培養(yǎng)基,用預溫 PBS 小心洗滌。重復洗滌步驟。

3.棄去 PBS 洗滌液并小心加入無血清培養(yǎng)基。

4.孵育 1-2 天。

5.將培養(yǎng)基移至離心管,4℃ 1,500 rpm 離心 10 分鐘。

6.立即分裝上清并于 -80℃ 保存。避免反復凍融。

 

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