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用鑒定試劑盒做微生物生化鑒定操作流程與注意事項(xiàng)
閱讀：1937 發(fā)布時(shí)間：2021-5-17生化鑒定試劑盒HiBio-ID™，試劑盒包含生化鑒定卡、輔助試劑、結(jié)果詮釋表和標(biāo)準(zhǔn)菌種表。一個(gè)生化鑒定卡上集成了12種或24種生化試驗(yàn)，將反應(yīng)后的顯色結(jié)果與《結(jié)果詮釋表》、《菌種標(biāo)準(zhǔn)表》比對后，從而對菌種作出鑒定。
操作流程：
1，準(zhǔn)備接種液
①待測菌株需要先分離純化。只有純化的菌株才能用于檢測。可用普通培養(yǎng)基如營養(yǎng)瓊脂（#M001）或適合的鑒別培養(yǎng)基分離菌株。（具體培養(yǎng)基以說明書為準(zhǔn)）
②挑取單個(gè)菌落，接種到5ml腦心浸出液肉湯，在35-37℃培養(yǎng)4-6小時(shí)，直到菌液濁度達(dá)到產(chǎn)品說明書上的要求。一些苛養(yǎng)菌可能需要孵育6小時(shí)以上。在這種情況下，孵育應(yīng)使接種液濁度達(dá)到OD值或McFarland濁度標(biāo)準(zhǔn)。
③遵循產(chǎn)品說明書的要求操作。
注意：如果接種液濁度＜0.1OD或0.5 McFarland標(biāo)準(zhǔn)，可能會(huì)得到錯(cuò)誤的假陰性結(jié)果。
2，接種
①無菌打開試劑盒，撕去密封箔。
②采用表面接種方法，在鑒定卡上每孔加50μl上述接種液。每孔用接種環(huán)涂抹接種。
3，孵育
HiBio-ID™生化鑒定卡中，貨號為KB001--KB014的產(chǎn)品，均在35℃±2℃培養(yǎng)18-24小時(shí)，只有KB006例外，需在室溫（22-25℃）孵育48-72小時(shí)。
4，試劑
必要時(shí)需要添加其他顯色試劑，培養(yǎng)結(jié)束后，個(gè)別微孔需要加入1-2滴顯色劑，等待幾秒鐘或幾分鐘。顏色發(fā)生變化。
5，讀取結(jié)果
人工讀取結(jié)果：顯色結(jié)果與《結(jié)果詮釋表》比對，確定是否存在陽性反應(yīng)。再根據(jù)《菌種標(biāo)準(zhǔn)表》完成鑒定/或用HiBio-ID™Readers生化鑒定儀鑒定。
注意事項(xiàng)：
1. 試驗(yàn)前，將試劑盒從冰箱取出，放置在室溫。
2. 某些菌的糖發(fā)酵可能不顯著，這時(shí)可記錄為±，孵育延長至48小時(shí)。之后顯示為橘黃色則為陰性。
3. 對于賴氨酸和鳥氨酸脫羧試驗(yàn)，孵育可能需要延長至48小時(shí)。
4. 如果菌種出現(xiàn)矛盾的結(jié)果，可能因?yàn)榫N突變或用于分離培養(yǎng)的培養(yǎng)基的緣故。