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ELISA試劑盒曲線問題解析
閱讀：122 發(fā)布時間：2025-2-25 ELISA試劑盒試驗標準曲線做的好與壞會直接影響到實驗的結果，甚至是關系到實驗的成敗。下面將影響ELISA試劑盒曲線問題的原因做了總結：
一 OD值不正常的可能原因是：
1、試劑盒未回溫，試劑盒回溫到25℃；
2、溫度控制不好，控制正確溫度；
3、孵育時間不準確，控制孵育時間；
4、洗滌時沖擊力太大、浸泡時間過長、洗滌次數增 加，洗滌4-5次，每孔250ul，然后拍干；
5、陽光直射，對著風直接吹，避風避光；
6、酶標儀的波長錯誤，酶標儀的波長450nm；
7、抗體的稀釋錯誤，正確的稀釋抗體；
8、水質問題，用娃哈哈礦泉水代替。
二 白板的可能原因是：
1、洗滌液配制錯誤，正確的配制洗滌液；
2、少加液體（錯加液體），正確的步驟加液體。
三 無梯度可能原因是：
1、標準品也污染，換標準品點板；
2、OD值不正常，控制溫度時間在做一次；
3、人為點板，不要點板。
四 線性不好可能原因是：
OD值不正常，控制溫度時間在做一次。
做標準曲線樣品檢測時有幾個問題需要注意：
1、樣品的濃度等指標是根據標準曲線計算出來的，所以首先要把做標準曲線看作是比做正式實驗還要重要的一件事，否則后面的實驗結果無從談起。
2、設置標準曲線樣品的標準濃度范圍要有一個比較大的跨度，并且要能涵蓋你所要檢測實驗樣品的濃度，即樣品的濃度要在標準曲線濃度范圍之內，包括上限和下限。而對于呈S型的標準曲線，盡量要使實驗樣品的濃度在中間坡度最陡段，即曲線幾乎成直線的范圍內。
3、最好采用倍比稀釋法配制標準曲線中的標準樣品濃度，這樣就能夠保證標準樣品的濃度不會出現較大的偏離。
4、檢測標準樣品時，應按濃度遞增順序進行，以減少高濃度對低濃度的影響，提高準確性。
5、標準曲線的樣品數一般為7個點，但至少要保證有5個點。
6、做出的標準曲線相關系數因實驗要求不同而有所變動，但一般來說，相關系數R至少要大于0.98，對于有些實驗，至少要0.99甚至是0.999。