化工儀器網(wǎng)
產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號 | A01X1307 | 主要用途 | 僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
| 組織來源 | 膽囊組織 | 種屬來源 | 人 |
| 生長特性 | 貼壁 | 細(xì)胞形態(tài) | 上皮樣，多角形細(xì)胞 |
詳細(xì)介紹
一、細(xì)胞基本屬性：
細(xì)胞名稱 | 人膽囊微血管內(nèi)皮細(xì)胞 | 商品貨號 | A01X1307 |
組織來源 | 膽囊組織 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
種屬來源 | 人 | 傳代特性 | 細(xì)胞特性確定傳代 |
生長特性 | 貼壁培養(yǎng) | 細(xì)胞形態(tài) | 上皮樣，多角形細(xì)胞 |
包被條件：
培養(yǎng)基：原代內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)體系
換液頻率：每2-3天換液一次
傳代比例：
消化液：0.25%胰蛋bai酶
培養(yǎng)條件：氣相： 空氣，95%；CO2 ，5%
細(xì)胞簡介 |
膽囊， 是位于右方肋骨下肝臟后方的梨形囊袋構(gòu)造，有濃縮和儲(chǔ)存膽汁之作用。 膽囊壁由粘膜、肌層和外膜三層組成。微血管作為分布廣的血管。它是連接微 動(dòng)脈和微靜脈的血管。它們分支并互相吻合成網(wǎng)。管壁薄，通透性強(qiáng)。其功能是 利于血液與組織之間進(jìn)行物質(zhì)交換。 微血管管壁主要由一層內(nèi)皮細(xì)胞和基膜組成。細(xì)的毛細(xì)血管橫切面由一個(gè)內(nèi)皮細(xì) 胞圍成。 |
原代細(xì)胞實(shí)驗(yàn)步驟：
一、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。
二、在超凈工作臺中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中，去除小腦和間腦。
三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動(dòng)以去除軟腦膜和腦膜大血管，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。
四、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì)、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質(zhì)。
五、大腦皮質(zhì)放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶，200-400U DNaseI)，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。
六、室溫1 000×g離心8min，去上清液。
七、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻，1 000×g，20min，4℃離心，去上清。
八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min，去上清液。
九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min，4℃)，1000×g，4℃離心10min。
十、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM
漂洗兩次(離心1000×rpm，6min，室溫)，去上清液。
加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中，置于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養(yǎng)基，隨后隔天換液。
原代細(xì)胞使用方法：
是一種貼壁培養(yǎng)細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)呈上皮樣，多角形細(xì)胞，在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下，細(xì)胞可傳2-3代；建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。
客戶收到細(xì)胞后，請按照以下方法進(jìn)行操作。
1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 貼壁細(xì)胞消化
1)吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次；
2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；
3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補(bǔ)充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；
4)待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。
3. 細(xì)胞收貨脫落
1)收集所有細(xì)胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀；
2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化；
3)經(jīng)1000rpm，離心5min，丟棄上清，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)；
4)待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱)。
5)原瓶內(nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理。
4. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
因原代細(xì)胞貼壁特殊性，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時(shí)，需要對實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被，以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性，避免細(xì)胞因沒貼好影響實(shí)驗(yàn)；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據(jù)細(xì)胞種類而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被。
公司正在出售的產(chǎn)品：
小鼠黑色素瘤細(xì)胞GFP熒光穩(wěn)轉(zhuǎn)株
人慢性髓原白血病細(xì)胞GFP熒光穩(wěn)轉(zhuǎn)株
人胚腎細(xì)胞GFP熒光穩(wěn)轉(zhuǎn)株
人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞RFP熒光穩(wěn)轉(zhuǎn)株
小鼠腦神經(jīng)瘤細(xì)胞RFP熒光穩(wěn)轉(zhuǎn)株
人結(jié)直腸癌細(xì)胞RFP熒光穩(wěn)轉(zhuǎn)株
人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞mCherry熒光穩(wěn)轉(zhuǎn)株
人結(jié)腸癌細(xì)
小鼠肌腱前體細(xì)胞
人甲狀腺癌細(xì)胞
人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞
高轉(zhuǎn)移人肝癌細(xì)胞
人胰腺癌細(xì)胞
人子宮頸表皮癌細(xì)胞
人飼養(yǎng)層上皮細(xì)胞
Halomonas glaciei冰川鹽單胞菌
Pediococcus stilesii斯氏片球菌
Marinobacter vinifirmus強(qiáng)酒海桿狀菌
Geobacillus toebii就地堆肥地芽孢桿菌
Geobacillus jurassicus侏羅紀(jì)地芽孢桿菌
Geobacillus tepidamans喜溫地芽孢桿菌
Ureibacillus terrenus地尿素芽孢桿菌
Marinobacter lipolyticus解脂海桿狀菌
Marinobacter koreensis韓國海桿狀菌
Arthrobacter bergerei貝氏節(jié)桿菌
人膽囊微血管內(nèi)皮細(xì)胞Vibrio harveyi哈氏弧菌
Flavobacterium saccharophilum噬糖黃桿菌
Arthrobacter protophormiae原玻璃蠅節(jié)桿菌
Photobacterium sp.發(fā)光桿菌
Vibrio splendidus燦爛弧菌
化工儀器網(wǎng)