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白介素-6受體（可溶性）ELISA KIT

白介素-6受體（可溶性）ELISA KIT，專為定量檢測生物樣本里可溶性白介素 - 6 受體含量設(shè)計，在科研領(lǐng)域?qū)γ庖呒把装Y研究意義重大。

1. 檢測原理：基于雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附測定法。酶聯(lián)板預(yù)先包被針對可溶性白介素 - 6 受體的特異性抗體。樣本加入后，其中的可溶性白介素 - 6 受體與固相抗體結(jié)合。隨后加入酶標(biāo)記的抗可溶性白介素 - 6 受體抗體，形成 “固相抗體 - 可溶性白介素 - 6 受體 - 酶標(biāo)抗體" 復(fù)合物。經(jīng)洗滌去除未結(jié)合物，加入底物溶液（如 TMB），在酶催化下底物顯色，顏色深淺與樣本中該受體含量成正比。通過酶標(biāo)儀在 450nm 波長測吸光度，與標(biāo)準(zhǔn)曲線對比得出樣本中可溶性白介素 - 6 受體濃度。

2. 試劑盒組成

• 酶聯(lián)板：有 96 孔或 48 孔規(guī)格，預(yù)包被抗體，為反應(yīng)承載物。

• 標(biāo)準(zhǔn)品：通常為凍干品，需用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液復(fù)溶并稀釋成系列濃度梯度，如 0、15.6、31.2、62.5、125、250、500、1000 pg/mL，用于繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

• 樣本xi釋液：用于稀釋濃度過高的待測樣本，使樣本濃度適配試劑盒檢測范圍。

• 酶標(biāo)抗體：即 HRP 標(biāo)記的抗可溶性白介素 - 6 受體抗體，為濃縮液，需用酶標(biāo)抗體稀釋液按要求稀釋。

• 酶標(biāo)抗體稀釋液：專門用于稀釋酶標(biāo)抗體。

• 底物溶液：如 TMB 底物，與酶標(biāo)抗體中的 HRP 反應(yīng)產(chǎn)生顏色變化。

• 洗滌液：一般為濃縮液，按比例用蒸餾水或去離子水稀釋后，用于洗滌酶聯(lián)板，去除未結(jié)合物質(zhì)，降低背景干擾。

• 終止液：多為強(qiáng)酸溶液（如硫酸），用于終止底物顯色反應(yīng)，穩(wěn)定反應(yīng)液顏色以便讀數(shù)。

• 封板膜：溫育時覆蓋酶聯(lián)板，防止液體蒸發(fā)和外界污染。

• 使用說明書：詳細(xì)介紹使用方法、注意事項、性能指標(biāo)等。

3. 樣本要求

• 血清：采集血液后，室溫放置 2 小時或 4℃過夜，1000×g 離心 20 分鐘取上清，采血需用無熱原、無內(nèi)毒素一次性器材。

• 血漿：可用 EDTA、肝素等抗凝，樣本采集后 30 分鐘內(nèi)，2 - 8℃下 1000×g 離心 15 分鐘取上清。

• 細(xì)胞培養(yǎng)上清：1000×g 離心 20 分鐘，去除細(xì)胞碎片和雜質(zhì)后取上清檢測。

• 組織勻漿：用預(yù)冷 PBS（0.01M，pH = 7.4）沖洗組織，去除殘留血液，剪碎組織后按 1:9（w/v）加 PBS，冰上充分研磨，5000×g 離心 5 - 10 分鐘取上清。

• 樣本采集后若短期內(nèi)檢測，可 4℃保存；長期保存需 - 20℃或 - 80℃凍存，且避免反復(fù)凍融，溶血樣本一般不適合檢測。

4. 操作流程

• 準(zhǔn)備工作：從冰箱取出試劑盒，平衡至室溫（約 30 分鐘），稀釋濃縮洗滌液。

• 加樣：設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔?？瞻卓准訕颖緓i釋液，標(biāo)準(zhǔn)品孔加不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品，樣本孔加處理好的樣本，每孔加樣量通常 100μL，輕輕混勻，37℃溫育 90 分鐘。

• 洗滌：棄去孔內(nèi)液體，用洗滌液加滿各孔，浸泡 1 - 2 分鐘后甩干，重復(fù)洗滌 5 次，確保洗凈未結(jié)合物質(zhì)。

• 加酶標(biāo)抗體：每孔加 100μL 稀釋好的酶標(biāo)抗體工作液，37℃溫育 60 分鐘。

• 再次洗滌：重復(fù)上述洗滌步驟。

• 顯色：每孔加 90μL 底物溶液，輕輕混勻，37℃避光顯色 15 - 30 分鐘（依實際顯色情況判斷）。

• 終止反應(yīng)：每孔加 50μL 終止液，溶液顏色由藍(lán)色變?yōu)辄S色。

• 讀數(shù)：加終止液后 15 分鐘內(nèi)，用酶標(biāo)儀在 450nm 波長測各孔吸光度（OD 值）。

• 計算結(jié)果：以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，OD 值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)樣本 OD 值從標(biāo)準(zhǔn)曲線查出對應(yīng)濃度，若樣本稀釋過，需乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)得實際濃度。

5. 性能指標(biāo)

• 檢測范圍：常見為 15.6 - 1000 pg/mL 等區(qū)間，滿足多種樣本檢測需求。

• 靈敏度：可低至 7.8 pg/mL 甚至更低，能檢測微量的可溶性白介素 - 6 受體。

• 特異性：對該受體高度特異，與其他細(xì)胞因子受體等幾乎無交叉反應(yīng)。

• 重復(fù)性：板內(nèi)變異系數(shù)一般小于 10%，板間變異系數(shù)小于 15%，保障檢測結(jié)果穩(wěn)定可靠。