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GP-Ⅳ ELISA
GP-Ⅳ ELISA，即糖蛋白 Ⅳ（Glycoprotein Ⅳ，GP-Ⅳ）酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒，是用于體外精準(zhǔn)定量檢測人體樣本中 GP-Ⅳ 含量的專業(yè)工具，在心血管疾病、腫瘤轉(zhuǎn)移等研究及相關(guān)疾病診斷中發(fā)揮著重要作用。GP-Ⅳ，又稱 CD36，廣泛分布于多種細(xì)胞表面，如血小板、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞以及血管內(nèi)皮細(xì)胞等，參與眾多生理和病理過程。
在心血管系統(tǒng)中，GP-Ⅳ 在血小板功能調(diào)節(jié)與動脈粥樣硬化進(jìn)程里扮演關(guān)鍵角色。正常情況下，血小板表面的 GP-Ⅳ 可與多種配體結(jié)合，調(diào)控血小板的黏附、聚集及活化。在動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展過程中，血管內(nèi)皮受損，血液中的單核細(xì)胞通過表面的 GP-Ⅳ 識別并攝取氧化低密度脂蛋白（ox-LDL），進(jìn)而分化為泡沫細(xì)胞，沉積于血管壁，促使動脈粥樣硬化斑塊形成。檢測血漿中 GP-Ⅳ 含量，有助于評估動脈粥樣硬化的發(fā)生風(fēng)險與病情進(jìn)展。在腫瘤研究領(lǐng)域，腫瘤細(xì)胞表面的 GP-Ⅳ 參與腫瘤細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞的黏附、遷移過程，與腫瘤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。以乳腺癌為例，高表達(dá) GP-Ⅳ 的乳腺癌細(xì)胞更容易突破基底膜，進(jìn)入血液循環(huán)并發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。通過檢測腫瘤組織或患者血清中的 GP-Ⅳ 水平，可輔助預(yù)測腫瘤轉(zhuǎn)移潛能，為腫瘤/治療方案的制定提供參考。
該試劑盒運(yùn)用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）技術(shù)。核心組件為預(yù)包被有抗人 GP-Ⅳ 單克隆抗體的微孔板。當(dāng)加入血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清等生物樣本后，樣本中的 GP-Ⅳ 會特異性地與包被抗體結(jié)合。結(jié)合反應(yīng)完成后，借助精心設(shè)計(jì)的洗板步驟，有效去除未結(jié)合的雜質(zhì)，為后續(xù)檢測營造純凈環(huán)境。隨后，加入酶標(biāo)抗人 GP-Ⅳ 抗體，其會與已結(jié)合在包被抗體上的 GP-Ⅳ 進(jìn)一步結(jié)合，形成穩(wěn)定的抗體 - 抗原 - 酶標(biāo)抗體復(fù)合物。再次進(jìn)行洗板操作，徹di清除未結(jié)合的酶標(biāo)抗體，接著加入底物 A 和底物 B 啟動顯色反應(yīng)。在辣根過氧化物酶（HRP）的催化作用下，底物發(fā)生反應(yīng)，顏色逐漸顯現(xiàn)，且顏色的深淺與樣本中 GP-Ⅳ 的含量呈正相關(guān)。使用者借助酶標(biāo)儀在特定波長下測定吸光度（OD 值），依據(jù)預(yù)先繪制好的標(biāo)準(zhǔn)曲線，即可精準(zhǔn)計(jì)算出樣本中 GP-Ⅳ 的濃度。
試劑盒組成科學(xué)合理，包含預(yù)包被微孔板、標(biāo)準(zhǔn)品、酶標(biāo)抗體、底物 A、底物 B、終止液、濃縮洗滌液以及樣本xi釋液等。從原材料的嚴(yán)格篩選采購，到生產(chǎn)過程中的精細(xì)制作，再到成品的多輪嚴(yán)格檢驗(yàn)，每一個環(huán)節(jié)都層層把關(guān)，確保為使用者提供質(zhì)量穩(wěn)定、結(jié)果準(zhǔn)確的試劑盒。
在操作流程方面，血清樣本需自然凝固后離心取上清；血漿樣本則需使用合適抗凝劑（如枸櫞/酸鈉、EDTA 等）處理后離心。細(xì)胞培養(yǎng)上清樣本若有沉淀需先離心去除。合理設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，分別準(zhǔn)確加入標(biāo)準(zhǔn)品和經(jīng)過稀釋的樣本。將微孔板放入 37℃恒溫箱中溫育，使抗原抗體充分反應(yīng)。溫育結(jié)束后，洗板操作至關(guān)重要，務(wù)必保證洗滌充分，防止殘留物質(zhì)干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。加入酶標(biāo)抗體后再次溫育，由于底物對光敏感，在加入底物進(jìn)行顯色時，必須在避光條件下操作。顯色達(dá)到規(guī)定時間后，加入終止液終止反應(yīng)，最后使用酶標(biāo)儀讀取 OD 值。值得注意的是，不同批次的試劑盒組分嚴(yán)禁混用，整個操作過程必須嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行，以此保障檢測結(jié)果的可靠性和準(zhǔn)確性。