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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
詳細(xì)介紹
一、原理
黃曲霉B1ELISA檢測(cè)試劑盒糧油版采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法定量檢測(cè)樣品中黃曲霉B1的殘留量。
二、適用范圍
定量檢測(cè)糧食、植物油等樣品中黃曲霉B1的殘留。
三、黃曲霉B1ELISA檢測(cè)試劑盒糧油版特點(diǎn)及技術(shù)指標(biāo)
* 檢 測(cè) 時(shí) 間 ： 30 min
* 試劑盒靈敏度： 0.03ppb(µg/kg)
* 試劑盒提供工作濃度標(biāo)準(zhǔn)品，使用更方便；
* 試劑盒檢測(cè)樣本的靈敏度和準(zhǔn)確度：
樣本 | 檢測(cè)下限 | 回收率 |
糧油 | 1.5ppb | 70%-120% |
試劑盒特異性：
藥物名稱(chēng) | 交叉反應(yīng)率（%） |
黃曲霉B1 | * |
黃曲霉G1 | < 1% |
四、所需材料
儀器：微孔板酶標(biāo)儀450 nm/630 nm、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管（10 mL）、洗耳球、天平（感量0.01 g）、離心管（5 mL, 50 mL）、微量移液器：?jiǎn)蔚?1µL～10 µL、10 µL～100µL、多道 50µL～300µL
試劑：正己烷、甲醇、去離子水。
五、 試劑盒組成
序號(hào) | 組成部分 | 96T裝量 |
1 | 黃曲霉B1酶標(biāo)板 | 12×8孔 |
2 | 黃曲霉B1標(biāo)準(zhǔn)品濃度*5 | 5×1mL |
3 | 黃曲霉B1酶標(biāo)物 | 7 mL |
4 | 黃曲霉B1抗體 | 7 mL |
5 | 底物液A液 | 7 mL |
6 | 底物液B液 | 7 mL |
7 | 終 止 液 | 7 mL |
8 | 20×濃縮洗滌液 | 40 mL |
9 | 2×黃曲霉B1樣品稀釋液 | 40 mL |
*注：A、B、C、D、E 5個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品濃度為：0ppb，0.03ppb，0.09ppb，0.27ppb，0.81ppb，A、B標(biāo)準(zhǔn)品各1mL，其余各0.5mL，直接使用。
六：溶液配制
配液1: 洗滌工作液
用去離子水將20 ×濃縮洗滌液按1 : 19體積比進(jìn)行稀釋。配好的洗滌工作液在4 ℃環(huán)境可保存一 個(gè)月，用前一天取出回溫。
配液2: 1 ×黃曲霉B1樣品稀釋液
用去離子水將2 ×黃曲霉B1樣品稀釋液按1:1體積比進(jìn)行稀釋。配好的1 ×黃曲霉B1稀釋液在4℃環(huán)境可保存一個(gè)月，用前一天取出回溫。
配液3: 樣品提取液
將甲醇與去離子水按V甲：V水=4：1 體積比配制成80%甲醇，即樣品提取液。
七、樣本前處理
樣本處理前須知：
① 處理完的樣品應(yīng)及時(shí)進(jìn)行下步檢測(cè)，實(shí)驗(yàn)中必須使用一次性吸頭，吸取不同試劑時(shí)要更換吸頭。
② 樣本數(shù)目超過(guò)8個(gè)時(shí)推薦使用排槍加樣。
（一）小麥粉、玉米粉、大米、花生、大豆
（稀釋倍數(shù)：50倍）
① 稱(chēng)取粉碎樣品1.0 g ± 0.05 g至離心管中，加入 8 mL 樣品提取液（配液3）， 震蕩提取1 min；
② 4000 r / min離心5 min；
③ 小心移取上清液100 μL 加到300μL 1 ×黃曲霉B1稀釋液中， 混勻，取50 μL用于分析。
（二）植物油 （稀釋倍數(shù)：50）
① 稱(chēng)取樣品1.0 g ± 0.05 g至離心管中，加入4 mL 正己烷，再加入4 mL 樣品提取液（配液3）， 震蕩提取1 min；
② 4000 r / min離心5 min；
③ 小心移取下清液 100 μL 加到400 μL 1 ×黃曲霉B1樣品稀釋液中， 混勻，取50 μL用于分析。
八、 酶標(biāo)免疫測(cè)定程序
- 將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出，待其*回 升至室溫（20～25℃）后方可使用。注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
- 按標(biāo)準(zhǔn)品和樣品雙孔平行的數(shù)量使用微孔。
- 加標(biāo)準(zhǔn)品/樣品、酶、抗體：加標(biāo)準(zhǔn)品/樣品50µL到對(duì)應(yīng)的微孔中，加入黃曲霉B1酶標(biāo)物50µL/孔，再加入黃曲霉B1抗體50µL/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置37℃環(huán)境中反應(yīng)20min。
- 洗板：小心揭開(kāi)蓋板膜，將孔內(nèi)液體甩干，
加入洗滌工作液250µL/孔，每次靜置20s，甩去孔內(nèi)液體，重復(fù)洗滌3次，后一次用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用未使用過(guò)的槍頭戳破）。
- 顯色：加入底物液A液50µL/孔，再加底物
液B液50µL/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置37℃避光環(huán)境中反應(yīng)10min。
- 測(cè)定：加入終止液50µL/孔，用酶標(biāo)儀立即 測(cè)定450nm處的吸光度值（建議用雙波長(zhǎng)450/630nm）檢測(cè)。
九、 結(jié)果判定
以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo)，以黃曲霉B1標(biāo)準(zhǔn)品濃度（ppb）的半對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)中，從標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上讀出樣本所對(duì)應(yīng)的濃度，乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中黃曲霉B1實(shí)際濃度。（詳見(jiàn)試劑盒專(zhuān)業(yè)分析軟件，以便進(jìn)行大量樣本的分析計(jì)算。）
十、 注意事項(xiàng)
① 洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。
② 反應(yīng)終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。
③ 不使用過(guò)了有效期的試劑盒，不交換使用不同批號(hào)的試劑。
④ 0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5）時(shí)，表示試劑可能變質(zhì)。
⑤ 在加入底物液A液和底物液B液后，一般顯色時(shí)間為10～15min即可。若顏色較淺，可延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間到20min，反之則減短反應(yīng)時(shí)間。
⑥ 未提及樣本請(qǐng)致電本公司技術(shù)服務(wù)部。
十一、貯藏條件及保存期
貯藏條件： 2～8℃
保 質(zhì) 期： 12個(gè)月