細(xì)菌是否有芽孢以及芽孢的形狀和位置都是細(xì)菌的重要特征，細(xì)菌的芽孢壁比營養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)復(fù)雜、致密、通透性低，著色和脫色都比營養(yǎng)細(xì)胞困難。芽孢有很強的抗熱和抗化學(xué)物質(zhì)的特性，當(dāng)采用堿性染料并加熱或延長染色時間時，使菌體和芽孢都能著色，再用蒸餾水沖洗脫去菌體顏色，但芽孢的顏色仍然可以保留，可以在顯微鏡下明顯區(qū)分芽孢和營養(yǎng)體的形態(tài)。

Leagene芽孢染色液(Scharffer-Fulton法)主要由孔雀綠染色液和芽孢復(fù)染色液組成，因此該法又稱為孔雀綠法，芽孢會被染成綠色，營養(yǎng)體呈紅色，試劑比較靈敏，操作簡單，結(jié)果判斷更可靠，但應(yīng)注意觀察芽孢應(yīng)在成熟期，但也不能過久，否則只能看到芽孢，而營養(yǎng)體已經(jīng)消失。該試劑僅用于科研領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。