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500毫摩爾超氧陰離子清除劑TEMPOL溶液
閱讀：2679 發(fā)布時間：2017-1-18500毫摩爾超氧陰離子清除劑TEMPOL溶液產(chǎn)品說明書（中文版）
主要用途
500毫摩爾超氧陰離子清除劑TEMPOL溶液是一種旨在模擬超氧化物歧化酶的功能，清除超氧自由基陰離子的輔助試劑。其適用于氧化應(yīng)急活性氧等研究。其適用于各種細(xì)胞培養(yǎng)、動物實驗中超氧自由基陰離子的清除。產(chǎn)品即到即用，嚴(yán)格無菌，性能穩(wěn)定，高純活性。
技術(shù)背景
4-羥基-2,2,6,6,-四甲基哌啶氧（4-hydroxy-2,2,6,6-tetramethylpiperidinyloxy；TEMPO）是一種自旋標(biāo)記（spin label）的水溶性穩(wěn)定哌啶氮氧化合物（piperidine nitroxide），分子式是C9H18NO2，分子量為172.24。其主要作用在于自由通過質(zhì)膜，具有超氧化物歧化酶的功能，清除超氧自由基陰離子，起到活性氧的解毒作用，同時具有神經(jīng)保護(hù)、抗炎和鎮(zhèn)痛作用。
產(chǎn)品內(nèi)容
清除劑（Reagent A） 毫升
產(chǎn)品說明書 1份
保存方式
保存在－20℃冰箱里，避免光照；有效保證6月
用戶自備
*細(xì)胞培養(yǎng)液：用于支持細(xì)胞生長的營養(yǎng)液
細(xì)胞培養(yǎng)板（瓶）：用于細(xì)胞培養(yǎng)的容器
蓋玻片：用于細(xì)胞生長的載體
臺式離心機(jī)：用于懸浮細(xì)胞的收集
細(xì)胞培養(yǎng)箱：用于細(xì)胞孵育
15毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器
實驗提示
實驗開始前，將－20℃冰箱里的清除劑（Reagent A）置于冰槽里融化。然后進(jìn)行下列操作：
方法一：貼壁細(xì)胞處理
- 在6孔細(xì)胞培養(yǎng)板里的1孔放置蓋玻片
- 加入2毫升用戶自備的*細(xì)胞培養(yǎng)液
- 加入1毫升待測細(xì)胞（1至5 X 105細(xì)胞）
- 輕輕搖動，使細(xì)胞均勻分布
- 放進(jìn)37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱孵育，直至細(xì)胞生長到50％鋪滿率
- 小心抽掉細(xì)胞培養(yǎng)液
- 加入3毫升新鮮的用戶自備的*細(xì)胞培養(yǎng)液
- 加入xx微升清除劑（Reagent A）
- 輕輕搖動培養(yǎng)板，混勻
- 放進(jìn)37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱孵育24小時
- 小心抽掉含有清除劑（Reagent A）的細(xì)胞培養(yǎng)液
- 繼續(xù)后續(xù)操作
方法二：懸浮細(xì)胞處理
- 準(zhǔn)備1個25cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶
- 加入2毫升用戶自備的*細(xì)胞培養(yǎng)液
- 加入1毫升待測細(xì)胞（5 X 105細(xì)胞）
- 輕輕搖動，使細(xì)胞均勻分布
- 放進(jìn)37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱孵育24小時
- 小心移出細(xì)胞培養(yǎng)液到15毫升錐形離心管
- 放進(jìn)臺式離心機(jī)離心10分鐘，速度為300g
- 小心抽掉上清液
- 加入3毫升新鮮的*細(xì)胞培養(yǎng)液，混勻細(xì)胞顆粒群
- 加入xx微升清除劑（Reagent A）
- 輕輕搖動離心管，混勻
- 放進(jìn)37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱孵育24小時
- 放進(jìn)臺式離心機(jī)離心10分鐘，速度為300g
- 小心抽掉含有清除劑（Reagent A）的細(xì)胞培養(yǎng)液
- 繼續(xù)后續(xù)操作
方法三：動物實驗
- 準(zhǔn)備1個待測的實驗動物
- 靜脈注射xx微升清除劑（Reagent A）/100克動物體重
- 或腹腔注射xx微升清除劑（Reagent A）/100克動物體重
- 或輸液/灌注xx至xx微升清除劑（Reagent A）/100克動物體重
- 注射后30分鐘至4小時繼續(xù)后續(xù)麻醉、斷頸椎、解剖、組織制片等操作
注意事項
- 本產(chǎn)品為1毫升規(guī)格（100倍濃度）
- 本產(chǎn)品即到即用，無需進(jìn)行任何處理
- 使用時，戴好手套
- 避免反復(fù)凍融
- 使用時，避免污染母液
- 細(xì)胞孵育時間可以根據(jù)用戶的具體情況調(diào)整，通常為6小時至24小時
- 動物實驗可以每天注射，持續(xù)1周，然后觀察分析