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技術(shù)文章

10% EDTA 脫鈣液說(shuō)明書

閱讀:5099          發(fā)布時(shí)間:2021-1-21

產(chǎn)品簡(jiǎn)介: EDTA 是一種相對(duì)較好的螯合脫鈣劑,對(duì)組織結(jié)構(gòu)影響小,可以較好的保存組織的某 些酶類,經(jīng) EDTA 脫鈣后的組織可以進(jìn)行免疫組化和原位雜交染色。但是該法脫鈣速度太慢, 一般脫需要數(shù)周至數(shù)月

保存條件: 2~8°C 保存。 
操作流程: 1、骨組織脫鈣時(shí),取材不易過(guò)厚,一般大約 5mm;
2、組織固定后,用 PBS 清洗 3 次,每次 20min;
3、組織用蒸餾水洗清洗 3 次,每次 20min; 
4、組織轉(zhuǎn)移至 20~30 倍體積的 EDTA 脫鈣液中,脫鈣 10~30 天或更長(zhǎng)時(shí)間。如果想加快 脫鈣速度,可以置于 37°C 進(jìn)行脫鈣。如果必要,更換新的 EDTA 脫鈣液繼續(xù)脫鈣,多數(shù)組 織脫鈣 2 周~3 個(gè)月即可,每周更換一次,直至終點(diǎn); 
5、用蒸餾水沖洗數(shù)次; 
6、常規(guī)脫水、包埋。

注意事項(xiàng): 1、 厚度 5mm 的骨組織塊脫鈣時(shí)間一般脫鈣 10~30 天即可。
 2、 適當(dāng)加溫能加快脫鈣的速度,一般不應(yīng)超過(guò) 37~40°C,溫度過(guò)高容易使骨組織造成松 散解體,尤其不可大于 60°C。
 3、脫鈣應(yīng)*,防止脫鈣不足或過(guò)度。脫鈣程度應(yīng)控制在不影響組織切片的同時(shí)盡量縮短 脫鈣時(shí)間,以免脫鈣過(guò)長(zhǎng)引起組織損害。 
4、 脫鈣用具避免使用金屬容器,盡量使用玻璃容器。
5、 骨組織脫鈣應(yīng)先固定后脫鈣或脫鈣固定同時(shí)進(jìn)行,不應(yīng)先脫鈣后固定,以便減少組織的 損傷程度。
 6、 每隔一段時(shí)間檢測(cè)一次脫鈣程度,避免脫鈣過(guò)度,脫鈣過(guò)度會(huì)增加組織的損傷程度,影 響染色結(jié)果。

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