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各種動物外周血中性粒細(xì)胞分離液試劑盒說明書
閱讀：1381 發(fā)布時間：2021-8-4各種動物外周血中性粒細(xì)胞分離液試劑盒
規(guī)格：200 mL/kit
保存：本產(chǎn)品對光敏感，應(yīng)該室溫避光儲存，保質(zhì)期 2 年。無菌開封后，保存于室溫。
試劑盒組成：
試劑A 200mL
試劑C 100mL
細(xì)胞洗滌液 200mL
紅細(xì)胞裂解液 100mL
操作步驟：
1. 取新鮮抗凝全血，血液體積小于5mL時，在離心管中先加入4mL試劑A，后將2mL試劑C小心疊
加于試劑A之上，形成梯度界面（血液體積大于等于5mL，試劑A與試劑C比例2：1，試劑總量與稀
釋后的樣本量相等。但二者的總體積不能超過離心管的三分之
二，否則會影響分離效果），將血液平鋪到分離液液面上方，
注意保持兩液面界面清晰。（可以使用巴氏德吸管吸取血液，
然后將血液小心的平鋪于分離液上，因?yàn)閮烧叩拿芏炔町?，?/p>
形成明顯的分層界面。如果樣品較多，加樣的時間較長，在離
心之前出現(xiàn)紅細(xì)胞成團(tuán)下沉屬正常現(xiàn)象。）
2. 室溫，水平轉(zhuǎn)子500~1000g，離心20~30min（血液的體積
越大所需的離心力越大，離心時間越長，最佳的分離條件需摸
索，離心轉(zhuǎn)速最大不超過1200g）。
3. 離心后，離心管中將出現(xiàn)兩層環(huán)狀乳白色細(xì)胞層，上層細(xì)
胞為單個核細(xì)胞層，下層細(xì)胞為中性粒細(xì)胞層，如圖所示（個
體差異或者是分離條件不同，粒細(xì)胞層可分離不明顯）。
4. 用吸管小心吸取試劑C與試劑A之間以及試劑A中的中性
粒細(xì)胞到15mL潔凈的離心管中，10mL PBS或細(xì)胞洗滌液洗滌
細(xì)胞。250g，離心10min（如有紅細(xì)胞混雜則加入適量紅細(xì)胞
裂解液）。
5. 棄上清，5mL的PBS或細(xì)胞清洗液重懸細(xì)胞，250g，離心
10min。
6. 重復(fù)步驟6
7. 棄上清，細(xì)胞重懸備用。
注意事項(xiàng)：
A. 開封前顛倒混勻，本分離液為無菌產(chǎn)品，為延長分離液保存時間，請?jiān)跓o菌條件下啟封，避免
微生物污染。。
B. 分離液使用時應(yīng)始終保持室溫（18℃~25℃），如室內(nèi)溫度較低，可將分離液預(yù)熱。4℃或者是
分離示意圖
血漿層
單個核細(xì)胞層
試劑 C
試劑 A
紅細(xì)胞層
中性粒細(xì)胞層
溫度較低的條件下離心，可能會導(dǎo)致白膜層中紅細(xì)胞污染加重。
C. 血液樣本最好為新鮮抗凝血（采血2 h以內(nèi)），為保持淋巴細(xì)胞的活性，應(yīng)避免冷凍和冷藏。
D. 血液樣本不需稀釋，直接進(jìn)行分離即可。
E. 稀釋血液或洗滌細(xì)胞，不可使用含Ca、Mg離子的緩沖液及培養(yǎng)液，其成分會導(dǎo)致血細(xì)胞凝集，
大大降低細(xì)胞得率及純度。
F. 部分塑料制品（如聚苯乙烯）因其帶有的靜電作用，可能會導(dǎo)致細(xì)胞掛壁，影響分離效果。
G. 血液樣本的粘稠度或者是溫度差異，可能會影響分離效果，可以調(diào)節(jié)離心轉(zhuǎn)數(shù)和離心時間，摸
索最佳的分離條件。
H. 如果要進(jìn)一步對分離的細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，那在收集血液和分離過程中，注意無菌操作，避免微生
物污染。
I. 不同動物血液在不同比重分離液中的細(xì)胞離散系數(shù)及細(xì)胞帶電不同，用戶在制定分離液時應(yīng)提
供所需分離液的比重、動物種屬及被分離細(xì)胞的名稱。