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PicoGreen雙鏈DNA熒光定量測(cè)定試劑盒產(chǎn)品說明書(簡(jiǎn)版）

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主要用途

 

 PicoGreen雙鏈DNA熒光定量測(cè)定試劑是一種旨在通過使用PicoGreen熒光染料與樣品中雙鏈DNA的高度特異性結(jié)合而產(chǎn)生熒光信號(hào)來精確定量樣品中DNA含量的經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種原核生物和真核生物的細(xì)胞或組織DNA以及環(huán)境中DNA含量分析。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌，即到即用，性能穩(wěn)定，高度敏感。

 

技術(shù)背景

 

作為DNA染色劑之一的PicoGreen熒光染料特異性地與樣品中雙鏈DNA結(jié)合，產(chǎn)生熒光信號(hào)。PicoGreen技術(shù)可以檢測(cè)到低達(dá)0.5納克雙鏈DNA的變化。DNA的微量增加引起熒光信號(hào)強(qiáng)度（Intensity）或相對(duì)熒光單位（RFU）的顯著增加。其自發(fā)熒光（Autofluorescence）忽略不計(jì)，重復(fù)性標(biāo)準(zhǔn)差異（Standard Deviation）低，不受樣品化學(xué)成分的干擾。

 

產(chǎn)品內(nèi)容

 

染色液（Reagent A）                      62.5微升

稀釋液（Reagent B）                       15 毫升

標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent C）                            1毫升

產(chǎn)品說明書                                 1份

 

保存方式

 

保存染色液（Reagent A）和標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent C）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里，染色液（Reagent A）避免光照，有效保證6月

 

用戶自備

 

1.5毫升離心管：用于工作液配制的容器

比色皿或96孔板：用于熒光分析的容器

熒光分光光度儀或熒光酶標(biāo)儀：用于熒光定量分析

 

實(shí)驗(yàn)步驟

 

一、 測(cè)定準(zhǔn)備

 

1． 準(zhǔn)備好待測(cè)樣品，置于冰槽里

2． 設(shè)定好熒光分光光度儀（溫度為37℃）：激發(fā)波長(zhǎng)480nm，散發(fā)波長(zhǎng)530nm，并置零 

3． 實(shí)驗(yàn)開始前，將－20℃冰箱里的試劑盒中的染色液（Reagent A）置于冰槽里融化。然后移出5毫升稀釋液（Reagent B）到新的15毫升離心管，加入25微升染色液（Reagent A），混勻后，用錫紙包裹，標(biāo)記為染色工作液，放在暗室里。然后進(jìn)行下列操作。

 

二、 構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線

 

1． 準(zhǔn)備好5個(gè)1.5毫升離心管，標(biāo)記為1至5號(hào)管

2． 分別加入500微升稀釋液（Reagent B）到每個(gè)離心管

3． 移取500微升標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent C）到1號(hào)管，混勻

4． 小心移取500微升1號(hào)管稀釋的標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent C）到2號(hào)管，混勻

5． 小心移取500微升2號(hào)管稀釋的標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent C）到3號(hào)管，混勻

6． 小心移取500微升3號(hào)管稀釋的標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent C）到4號(hào)管，混勻

7． 將1至5號(hào)管放進(jìn)冰槽里備用；標(biāo)準(zhǔn)管含量見下表