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細菌核糖體（ribosome）分離試劑盒說明書
閱讀：955 發(fā)布時間：2022-12-13
細菌核糖體（ribosome）分離試劑盒產(chǎn)品說明書
主要用途
細菌核糖體（ribosome）分離試劑是一種旨在通過化學破膜以及差速超速離心處理方法，分離出完整而純化的70S核糖體組分的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。適合于各種培養(yǎng)或臨床細菌菌株核糖體成分的分離。產(chǎn)品即到即用，操作簡易，性能穩(wěn)定，無核酶和蛋白酶污染，萃取純度和產(chǎn)量皆高。
技術(shù)背景
核糖體（ribosome）是一種細小顆粒的核糖蛋白復(fù)合物（ribonucleoprotein complex），生命細胞制造蛋白質(zhì)的非膜性結(jié)構(gòu)元素和轉(zhuǎn)譯裝置（translational apparatus），由RNA和蛋白質(zhì)組成，具有多肽轉(zhuǎn)移酶的活性，刺激RNA合成，并調(diào)節(jié)RNA、核糖體自身以及蛋白質(zhì)的生物合成。其分成2個亞體：大亞體和小亞體。核糖體通過大亞體結(jié)合轉(zhuǎn)運核糖體（tRNA），而小亞體結(jié)合信使RNA（mRNA），然后閱讀RNA提供的信息，轉(zhuǎn)譯（translation）成氨基酸，連接成蛋白分子。真核生物的核糖體位于胞漿（游離核糖體）、線粒體和葉綠體中。其中胞漿核糖體為80S核糖體，由40S小亞體和60S大亞體組成：60S由5S RNA、28S RNA、5.8S亞基和49個蛋白組成；而40S由18S RNA和33個蛋白組成。線粒體和葉綠體核糖體與原核生物相似，為70S核糖體，由30S小亞體和50S大亞體組成：50S包括5S、23S RNA和34個蛋白；30S包括16S RNA和21個蛋白。細菌核糖體成為抗菌藥物的靶標，其中50%以上抗菌素針對細菌核糖體。同時核糖體高度進化保留，成為種系分類（phylogenetic classification）的分子標志。
產(chǎn)品內(nèi)容
裂解液（Reagent A） 毫升
保存液（Reagent B） 毫升
產(chǎn)品說明書 1份
保存方式
保存在－20℃冰箱里，有效保證6月
用戶自備
50毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器
1.5毫升離心管：用于樣品操作和保存的容器
臺式離心機：用于樣品操作
超速離心機：用于樣品操作
超聲儀：用于裂解細胞
渦旋震蕩儀：用于混勻
實驗步驟
實驗開始前，將試劑盒里的試劑置于冰槽里凍融備用。然后進行下列操作。
1． 準備50毫升細菌（OD600=0.2或108細胞/毫升）
2． 轉(zhuǎn)移到50毫升錐形離心管
3． 放進臺式離心機離心30分鐘，速度為3000g
4． 小心抽去上清液
5． 加入預(yù)冷的xx毫升裂解液（Reagent A）
6． 渦旋震蕩15秒，充分混勻
7． 超聲處理100瓦功率，20秒一次重復(fù)4次
8． 置于冰槽里孵育30分鐘，期間每隔5分鐘渦旋震蕩15秒
9． 放進4℃臺式離心機離心15分鐘，速度為15000g
10． 小心移取上清液到新的高速離心管
11． 放進超速離心機離心15分鐘，速度為30000g
12． 小心移取上清液到新的高速離心管（注意：可以使用礦物油填滿離心管）
13． 放進4℃超速離心機離心2小時，速度為100000g
14． 小心取出離心管
15． 小心抽去上清液
16． 加入500微升或xx毫升保存液（Reagent B），混勻顆粒群
17． 轉(zhuǎn)移到新的1.5毫升離心管
18． （選擇步驟）進行核糖體定量測定
19． 放進－70℃冰箱里保存或置于冰槽里準備后續(xù)操作
注意事項
1． 本產(chǎn)品為20次操作（5 X 109細胞/次）
2． 建議使用足夠的細菌量
3． 樣品操作均須在4℃或以下狀態(tài)下進行
4． 操作時，須無菌操作，避免污染母液
5． 核糖體定量計算公式（微克/微升）： A260 ? 11.1
6． 如果進行核糖體蛋白萃取，建議使用純化核糖體蛋白質(zhì)萃取試劑盒—HL16041
7． 本公司提供系列核糖體分析技術(shù)產(chǎn)品
質(zhì)量標準
1． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
2． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定分離的核糖體維持正?；钚?/span>
3． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定不含污染性蛋白酶和核酶