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特殊石蠟切片總膽固醇菲律賓熒光直接染色試劑盒說明書
閱讀：1006 發(fā)布時間：2023-3-8特殊石蠟切片總膽固醇（酯酶法）菲律賓（FILIPIN）熒光直接染色試劑盒
產(chǎn)品說明書
主要用途
特殊石蠟切片總膽固醇（酯酶法）菲律賓（FILIPIN）熒光直接染色試劑是一種旨在通過特殊脫蠟處理，進(jìn)
而使用膽固醇酯酶水解和熒光染料菲律賓（FILIPIN）特異性與游離膽固醇反應(yīng)，形成復(fù)合體，并產(chǎn)生藍(lán)色
熒光，分析石蠟包埋組織切片中總膽固醇的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心改良、成功實驗證明
的。主要適用于各種人體和動物組織石蠟切片中總膽固醇的檢測。廣泛用于組織病理生理的研究。產(chǎn)品嚴(yán)
格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩(wěn)定，熒光清晰。 技術(shù)背景
膽固醇（cholesterol）是一類稱之為固醇類（sterols）或聚類異戊二烯（polyisoprenoid）或三萜皂甙元（triterpene）
的多環(huán)化合物（polycyclic compound）。其分子式為 cholest-5-en-3β-ol。膽固醇以游離（free form）和脂化結(jié)
合（ester）兩種形式廣泛存在于所有動物組織中，主要以非脂化形式存在于細(xì)胞膜中。在膜功能和脂代謝
以及激素合成中起著重要作用。菲律賓（FILIPIN）是一類由四種同分異構(gòu)體的多烯抗生素（polyene
antibiotics）或多馬霉素（polyene macrolide）的總稱。源自于 S. FILIPINENSIS 細(xì)菌的培養(yǎng)液中。其分子式
為 C35H58O11，分子量為 654.8。首先在膽固醇酯酶（cholesterol esterase）的水解下，酯化膽固醇（cholesterel ester）轉(zhuǎn)化為游離膽固醇，然后使用菲律賓與所有游離膽固醇結(jié)合形成聚集體或復(fù)合物，產(chǎn)生熒光。由于
石蠟包埋的組織切片在去石蠟的過程中，有機溶劑諸如二甲苯等容易破壞和減少組織中的脂質(zhì)成分，因此
使用非二甲苯類脫蠟，以保護(hù)組織中的膽固醇成分是菲律賓染色的關(guān)鍵。 產(chǎn)品內(nèi)容
脫蠟液（Reagent A） 20 毫升
凈化液（Reagent B） 5 毫升
清理液（Reagent C） 20 毫升
水解液（Reagent D） 4 毫升
抗干擾液（Reagent E） 4 毫升
染色液（Reagent F） 2 毫升
產(chǎn)品說明書 1 份
保存方式
保存水解液（Reagent D）和染色液（Reagent F）在－20℃冰箱里，避免光照；其余的保存在 4℃冰箱里；
有效保證 6 月
用戶自備
熒光顯微鏡：用于樣品染色后觀察分析
實驗步驟
一、 脫蠟處理
1． 取出待測的 6 微米厚的石蠟包埋的組織切片
2． 放進(jìn) 80℃烘箱，孵育 30 分鐘
3． 取出組織切片
4． 小心加上 500 微升脫蠟液（Reagent A）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面（注意：使用前，搖勻脫蠟
液）
5． 放進(jìn) 70℃恒溫培養(yǎng)箱里孵育 5 分鐘
6． 即刻小心移去切片上的脫蠟液（Reagent A）
7． （選擇步驟）重復(fù)實驗步驟 2 至 4 一次
8． 小心加上 200 微升凈化液（Reagent B）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面
9． 室溫下孵育 2 分鐘
10．小心移去切片上的凈化液（Reagent B）
11．進(jìn)一步依次常規(guī)凈化處理：用戶自備的 100%乙醇、70%乙醇、50%乙醇
12．小心加上 200 微升清理液（Reagent C）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面
13．室溫下孵育 3 分鐘
14．小心移去切片上的清理液（Reagent C）
三、樣本染色處理
1． 小心加入 200 微升水解液（Reagent C），鋪滿整個樣品表面
2． 室溫下孵育 1 小時（注意：可以延長至 4 小時，避免干枯）
3． 小心移去水解液（Reagent D）
4． 小心加入 200 微升清理液（Reagent C），清洗樣品表面
5． 小心移去清理液（Reagent C）
6． 重復(fù)實驗步驟 4 至 5 一次
7． 小心加上 200 微升抗干擾液（Reagent E），鋪滿整個切片樣品表面
8． 室溫下孵育 10 分鐘
9． 小心移去切片上的抗干擾液（Reagent E）
10．小心加上 100 微升染色液（Reagent F），鋪滿整個切片樣品表面
11．室溫下孵育 30 分鐘，避免光照
12．小心移去切片上的染色液（Reagent F）
13．小心加上 200 微升清理液（Reagent C），清洗樣品表面
14．小心移去切片上的清理液（Reagent C）
15．重復(fù)實驗步驟 13 至 14 二次
16．即刻放上蓋玻片或封片
17．在熒光顯微鏡下觀察：激發(fā)波長：340nm；散發(fā)波長：430nm――膽固醇陽性呈現(xiàn)藍(lán)色熒光
注意事項
1． 本產(chǎn)品為 20 次操作
2． 操作時，須戴手套
3． 建議用戶避免使用常規(guī)石蠟包埋組織切片，即石蠟包埋前避免二甲苯等透明處理
2
3
4． 操作時，避免污染母液
5． 試劑溶液在樣品表面時，避免有氣泡存在，同時確保鋪滿樣品表面
6． 熒光容易受到光漂白（photobleach），建議使用抗淬滅劑Ⅰ－12058.2
7． 樣品染色完成后，即刻進(jìn)行熒光顯微鏡觀察
8． 本公司提供系列組織細(xì)胞膽固醇染色試劑產(chǎn)品
質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
1． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
2． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定熒光清晰