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辛基-瓊脂糖凝膠 4FF
閱讀：1815 發(fā)布時(shí)間：2013-6-4辛基-瓊脂糖凝膠 4FF是將辛基鍵合在瓊脂糖凝膠4FF上形成的一種可利用疏水相互作用來(lái)實(shí)現(xiàn)目標(biāo)產(chǎn)品純化分離的疏水類(lèi)介質(zhì)。用于生物大分子和乙肝疫苗的純化分離。
1 外觀
本品為白色球狀凝膠,無(wú)嗅、無(wú)味、無(wú)肉眼可見(jiàn)雜質(zhì)。
2.理化指標(biāo)
| 項(xiàng) 目 | 指 標(biāo) | |
| 配 基 | R-O-CH2-CH（OH）-CH2-O- （CH2）7-CH3 | |
| 基 質(zhì) | 4% 交聯(lián)瓊脂糖 | |
| 形狀 | 球形 | |
| 粒徑 | 45~165 μm | |
| 配基密度 | 5 μmol octyl/ml medium | |
| 高流速（25℃） | 100KPa下≧150 cm/h* | |
| 耐 壓 | 0.15 MPa | |
| 耐 熱 | pH水中120℃20min | |
| 工作溫度 | 4~40℃ | |
| pH適用范圍 | 2~14（短時(shí)間，在位清洗）；3~12（長(zhǎng)時(shí)間） | |
| 化學(xué)穩(wěn)定性 | 以下溶液中穩(wěn)定； 1mol/L NaOH；70%EtOH；30%異丙醇；0.5%SDS；6mol/L鹽酸胍；8mol/L尿素；3 mol/L（NH4）2SO4 | |
*柱子：內(nèi)徑50mm、柱長(zhǎng)30cm。柱床高15cm,25℃, 流動(dòng)相為0.1mol/LNaCl。
3 包裝
產(chǎn)品以無(wú)菌試劑瓶密封包裝，外貼標(biāo)簽，注明“品名、體積、顆粒大小、應(yīng)用、生產(chǎn)單位”等內(nèi)容。所選用的包裝應(yīng)有利于保證產(chǎn)品質(zhì)量、方便運(yùn)輸和貯存。
4 運(yùn)輸
運(yùn)輸中應(yīng)避免日曬、雨淋、重壓，嚴(yán)禁與有毒、有害物品混運(yùn)。
5 貯存
產(chǎn)品應(yīng)密封貯存在4℃~30℃（保存溶液為20% 乙醇+0.1M醋酸鈉），通風(fēng)、干燥、清潔的地方。不能冷凍。
用過(guò)的柱子貯存在4℃（20% 乙醇）。
6 保質(zhì)期：
3年。
7 應(yīng)用
辛基-瓊脂糖凝膠 4FF是一種疏水層析介質(zhì)，利用樣品中組分疏水性的不同進(jìn)行分離。用于生物大分子的純化分離。
下面簡(jiǎn)要介紹介質(zhì)的使用過(guò)程。
7.1 裝柱
（1）讓所有的材料和試劑達(dá)到室溫。配制初始緩沖液（平衡液）和洗脫緩沖液。
（2）根據(jù)柱子大小取所需量的凝膠，清洗掉20%乙醇，抽干，用初始緩沖液（按凝膠：緩沖液=3：1的比例）配成勻漿。
（3）將柱內(nèi)及柱子底端用水或緩沖液潤(rùn)濕并保持一小段液位（液面略高于濾膜），務(wù)必使底端無(wú)氣泡。
（4）用玻璃棒引導(dǎo)勻漿沿著柱內(nèi)壁一次性倒入柱內(nèi)，注意勿使產(chǎn)生氣泡。打開(kāi)柱子出液口，使凝膠在柱內(nèi)自由沉降，連結(jié)好柱子頂端柱頭。
（5）打開(kāi)蠕動(dòng)泵，讓緩沖液用使用時(shí)流速的1.33倍的流速流過(guò)，使柱床穩(wěn)定。用2~3倍柱體積的緩沖液平衡柱子。
7.2 平衡
讓平衡緩沖液以一定流速流過(guò)柱子，到流出液電導(dǎo)和pH不變。平衡緩沖液一般是高鹽濃度的緩沖液，如0.02~0.05mol/L的PBS加1~2.5mol/L（NH4）2SO4等。
7.3 上樣
（1）樣品用平衡液配制，渾濁的樣品要離心和過(guò)濾后上樣。
（2）一般情況是讓目標(biāo)產(chǎn)品結(jié)合在柱子上，用平衡液洗去雜質(zhì)，再選擇一種洗脫液洗下目標(biāo)產(chǎn)品。
（3）介質(zhì)對(duì)樣品組分吸附的程度取決于樣品的疏水性質(zhì)、流動(dòng)相的離子強(qiáng)度和溫度。鹽濃度大、溫度高或樣品組分疏水性強(qiáng)，介質(zhì)對(duì)組分吸附牢。
7.4 洗脫
疏水介質(zhì)可用減小鹽濃度進(jìn)行洗脫。加表面活性劑或有機(jī)溶劑可加強(qiáng)洗脫。常用的洗脫液是低鹽濃度緩沖液，如0.02~0.05mol/L的PBS。
7.5 再生
一般用低鹽濃度的緩沖液洗，洗10倍以上柱體積，接著用結(jié)合蛋白的平衡液洗到平衡，可再次使用。
若有失活蛋白質(zhì)或脂類(lèi)物質(zhì)在再生時(shí)洗不掉，可用在位清洗（CIP）除去。
7.6 在位清洗
（1）對(duì)于以離子鍵結(jié)合上去的蛋白，可以用2M Nacl去除。
（2）對(duì)沉淀蛋白、對(duì)以疏水性結(jié)合的蛋白或脂類(lèi)，可用1M NaOH 去除。
（3）對(duì)強(qiáng)疏水性結(jié)合的蛋白、脂類(lèi)等，用4~10倍柱體積的70%乙醇或30%異丙醇清洗，但要注意有機(jī)溶劑的濃度以梯度的方式逐漸增加，否則容易產(chǎn)生氣泡。
清洗完畢后，用至少3倍緩沖液平衡柱子。
7.7注意
在裝柱、使用和保存柱子的時(shí)候，要避免柱子流干，氣泡進(jìn)入。
7.8 去熱源
用0.5M的氫氧化鈉清洗柱子5~6小時(shí)或用0.1M的氫氧化鈉24小時(shí)。或用以下方法步驟去除：
（1）2倍柱體積的70%乙醇；
（2）2倍柱體積50mM Tris-Hcl pH7.5；
（3）1倍柱體積4M尿素；
（4）3倍柱體積的Tris緩沖液+0.1M Nacl；
以上緩沖液都在無(wú)熱源的雙蒸水中配制。
7.9 消毒
用0.5~1M NaOH室溫下洗8~10倍柱體積，初始緩沖液平衡柱子。