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PCR測試盒技術 熒光探針和熒光染料及其原理
閱讀：1956 發(fā)布時間：2013-8-4 PCR測試盒 熒光探針和熒光染料及其原理2
1、 PCR測試盒原理技術 熒光探針和熒光染料及其原理分子信標
分子信標是一種在靶 DNA 不存在時構成莖環(huán)布局的雙符號寡核苷酸探針。在此發(fā)夾結構中，位于分子一端的熒光基團與分子另一端的淬滅基團緊緊接近。在此結構中，熒光基團被激起后不是發(fā)生光子，而是將能量傳遞給淬滅劑，這一進程稱為熒光諧振能量傳遞（ FRET ）。因為 " 黑色 " 淬滅劑的存在，由熒光基團發(fā)生的能量以紅外而不是可見光方式開釋出來。若是第二個熒光基團是淬滅劑，其開釋能量的波長與熒光基團的性質有關。分子信標的莖環(huán)結構中，環(huán)通常為 15-30 個核苷酸長，并與目標序列互補；莖通常 5-7 個核苷酸長，并彼此配對構成莖的結構。熒光基團銜接在莖臂的一端，而淬滅劑則銜接于另一端。分子信標有必要十分非常的設計，以致于在復性溫度下，模板不存在時構成莖環(huán)結構，模板存在時則與模板匹配。與模板配對后，分子信標的構象改動使得熒光基團與淬滅隔開。當熒光基團被激起時，它發(fā)出自身波長的光子。
2、PCR測試盒原理技術熒光探針和熒光染料及其原理TaqMan 探針
TaqMan 探針是多人具有的技術。 TaqMan 探針是一種寡核苷酸探針，它的熒光與目的序列的擴增有關。它設計為與目標序列上游引物和下流引物之間的序列配對。熒光基團連接在探針的 5’ 尾端，而淬滅劑則在 3’ 結尾端。當完好的探針與目標配對時，熒光基團發(fā)射的熒光因與 3’ 端的淬滅劑靠近而被淬滅。但在進行延伸反應時，聚合酶的 5’ 外切酶活性將探針進行酶切，使得熒光基團與淬滅劑分離。 TaqMan 探針適合于各種耐熱的聚合酶，如 DyNAzymeTM II DNA 聚合酶。隨著擴增循環(huán)數(shù)的增多，釋放出來的熒光基團不斷堆集。因而熒光強度與擴增產品的數(shù)量呈正比關系。