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1.特異性抗體與固相載體銜接，構(gòu)成固相抗體：洗刷除掉未的抗體及雜質(zhì)。

2.加受檢標(biāo)本：使之與固相抗體觸摸反響一段時(shí)問(wèn)，讓標(biāo)本中的抗原與固相載體上的抗體，構(gòu)成固相抗原復(fù)合物。洗刷除掉其他未的物質(zhì)。

3.加酶標(biāo)抗體：使固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標(biāo)抗體。*洗刷未的酶標(biāo)抗體。此刻固相載體上帶有的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量成正相關(guān)。

4.加底物：夾心式復(fù)合物中的酶催化底物變成有色產(chǎn)品。依據(jù)色彩反響的程度進(jìn)行該抗原的定性或定量。

 

    依據(jù)相同原理，將大分子抗原別離制備固醫(yī)學(xué)教丨育網(wǎng)收拾相抗原和酶標(biāo)抗原物，即可用雙抗原夾心法測(cè)定標(biāo)本中的抗體。

 

    用組成的HEV多肽抗原包被微孔板板條，這些多肽是中國(guó)型HEV毒株中心氨基酸序列中抗原性很強(qiáng)的肽段，別離來(lái)自于該毒株的開(kāi)放閱讀框2和開(kāi)放閱讀框3。將樣品或規(guī)范品參加孔中并孵育，若是其間存在HEV IgM抗體，這些抗體就會(huì)與HEV 的多肽抗原，并固定在上面，洗板除掉其它非特異性抗體和樣品中的其它成份。然后參加羊抗人IgM-HRP（辣根過(guò)氧化物酶）酶物，經(jīng)第2次孵育后，酶物就會(huì)與孵育上的HEV IgM抗體相，洗板除掉未的酶物，參加TMB底物溶液。

 

    在第三次孵育時(shí)會(huì)發(fā)作酶-底物反響，只要那些富含HEV IgM抗體和酶物所構(gòu)成的復(fù)合物的孔才會(huì)發(fā)作色彩改變，參加硫酸溶液停止酶和底物間的反響，并在波長(zhǎng): 450nm處丈量O.D.值,依照本HEV IgM抗體elisa試劑盒的測(cè)驗(yàn)規(guī)范, O.D.值大于或等于Cut-Off值的樣品被認(rèn)為是初試陽(yáng)性。

 

 

        將規(guī)范、樣品提取物和三聚氰胺酶符號(hào)物增加到現(xiàn)已包被有三聚氰胺抗體的微孔中開(kāi)端反響。在30分鐘的培育過(guò)程中，樣品萃取物中的三聚氰胺與三聚氰胺酶符號(hào)物競(jìng)賽微孔中的三聚氰胺抗體，培育30分鐘后洗掉微孔中所有沒(méi)有的三聚氰胺及三聚氰胺酶符號(hào)物。在用稀釋的洗液清洗結(jié)束后，每孔中增加明澈的底物溶液，的酶符號(hào)物將無(wú)色的底物轉(zhuǎn)化為藍(lán)色的物質(zhì)。培育20分鐘后間斷此反響，依據(jù)各孔顏色深淺進(jìn)行數(shù)據(jù)讀取。依據(jù)規(guī)范的顏色得出樣品中三聚氰胺的的濃度值。

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 　　咱們現(xiàn)已對(duì)可以呈如今檢測(cè)樣品中的許多有機(jī)和無(wú)機(jī)物做了檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)它們不與這個(gè)試劑盒發(fā)生穿插反響。然而在樣品中也富含一些簡(jiǎn)單蛻變的化合物，它們通過(guò)基質(zhì)影響來(lái)煩擾測(cè)定，如含脂肪的食物，它們?cè)跍y(cè)定前要通過(guò)稀釋來(lái)消除一些基質(zhì)對(duì)試驗(yàn)效果的影響。在運(yùn)用的過(guò)程中出現(xiàn)失誤也會(huì)影響效果，例如試劑盒存儲(chǔ)的條件、羅致液體的程序、羅致液體的不、在發(fā)生免疫和底物反響的過(guò)程中培育時(shí)刻不。