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大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶-2酶聯(lián)免疫分析說明書
閱讀：1131 發(fā)布時間：2013-8-22| 提 供 商 | 上海哈靈生物科技有限公司 | 資料大小 | 5.3KB |
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目的：研究使用此試劑本試劑盒測定大鼠血清，血漿，
基質(zhì)金屬蛋白酶2（MMP-2）含量的上清液樣品。
實驗原理：
大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶檢測樣品，本試劑盒的雙抗體夾心法（MMP-2）水平的2。與純
大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶2（MMP-2）抗體包被微孔板，制成固相抗體，單克隆抗體的多孔涂層
基質(zhì)金屬蛋白酶2（MMP-2），然后加入MMP-2抗體、HRP標記的抗體結(jié)合，形成
抗體復(fù)合物酶與底物TMB顯色，*清洗后。TMB HRP催化酶轉(zhuǎn)化
在酸的作用下進入決賽的黃色?；|(zhì)金屬蛋白酶的顏色深度和樣品中的2（MMP
正相關(guān)。測得的吸光度在450nm波長與ELISA（OD值），通過標準曲線計算樣品
基質(zhì)金屬蛋白酶2（MMP-2）濃度。
試劑盒組成：
試劑盒組成48孔配置96孔配置保
說明書1份1份
封板膜2片（48）2片（96）
密封袋1個1個
酶標包被板1×481×962-8℃保
標準品：450μg/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保
標準品稀釋液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保
酶標試劑3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保
樣品稀釋液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保
顯色劑A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保
顯色劑B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保
終止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保
濃縮洗滌液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保
樣本處理及要求：
1.血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收
清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。
2.血漿：應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，
20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該
離心。
3.尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存
中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4.細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-30
分）。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，
濃度達到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20
鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
5.組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)?/div>
用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器
將標本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。分裝后一份待
檢測，其余冷凍備用。
6.標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上
進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
7.不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟：
1.標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設(shè)標準品孔10孔，在*、第二孔中分別加標
準品100μl，然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；然后從*孔、第二
孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，
混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔
中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各
取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混
勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準
品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，
濃度分別為300μg/L，200μg/L，100μg/L，50μg/L，25μg/L）。
2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣
品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣
品終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混
勻。
3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此
重復(fù)5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7.溫育：操作同3。
8.洗滌：操作同5。
9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15分鐘.
10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
11.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應(yīng)在加終止
液后15分鐘以內(nèi)進行。
注意事項：
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未
用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。
3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間
控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
4．請每次測定的同時做標準曲線，做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值
大于標準品孔*孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計
算時請后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用。
10.如與英文說明書有異，以英文說明書為準。
計算：
標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，
在坐標紙上繪制標準曲線，根據(jù)OD樣品
從標準曲線查出相應(yīng)的濃度值乘以稀釋；
多；或與標準濃度與標準計算
標準曲線的線性回歸方程，樣本的OD值
方程，計算樣品濃度，再乘以稀釋
多，為樣品的實際濃度
?。ù藞D僅供參考）
試劑盒性能：
1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.95以上。
2.批內(nèi)與批見應(yīng)分別小于9%和11%
檢測范圍：
20μg/L-400μg/L
保存條件及有效期：
1.試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6個月