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羅丹明123 簡(jiǎn)易細(xì)胞核外形態(tài)染色試劑盒
產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)
主要用途
羅丹明123 簡(jiǎn)易細(xì)胞核外形態(tài)染色試劑是一種旨在通過(guò)熒光染料羅丹明123 快速集聚在細(xì)胞核周圍的活體
線粒體，呈現(xiàn)黃綠色，用于分析和觀察細(xì)胞核外圍形態(tài)的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、
成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種細(xì)胞核外或線粒體形態(tài)（動(dòng)物、人體、植物、昆蟲(chóng)等）的觀察。產(chǎn)品嚴(yán)格
無(wú)菌，即到即用，熒光清晰，操作簡(jiǎn)捷，性能穩(wěn)定。
技術(shù)背景
線粒體是細(xì)胞中重要的細(xì)胞器，大量存在于代謝旺盛的細(xì)胞中，分布在細(xì)胞核周圍。線粒體標(biāo)記熒光探針
羅丹明123（Rhodamine123），是一種膜電位敏感的陽(yáng)離子熒光染料，可以自由進(jìn)入細(xì)胞，高度選擇性地聚
集在線粒體。在活細(xì)胞狀態(tài)下直接染色，借助480nm 或500nm 激發(fā)波長(zhǎng)可以清晰看到被染成黃綠色的線狀
或顆粒小體的線粒體，分布在細(xì)胞核周圍。
產(chǎn)品內(nèi)容
染色液（Reagent A） 微升
產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)1 份
保存方式
保存在－20℃冰箱里，避免光照；有效保證6 月
用戶自備
磷酸緩沖液：用于清洗樣品
微型臺(tái)式離心機(jī)：用于懸浮細(xì)胞的操作
蓋玻片：用于染色后封片
熒光顯微鏡：用于觀察細(xì)胞核DNA 染色
實(shí)驗(yàn)步驟
一、貼壁細(xì)胞染色
1． 準(zhǔn)備1 個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)48 孔板的待測(cè)細(xì)胞，每孔鋪滿率達(dá)70％
2． （注意：可以使用載玻片，載玻片培養(yǎng)皿，35mm 培養(yǎng)皿，和其它培養(yǎng)孔板，見(jiàn)注意事項(xiàng)5）
3． 小心抽去細(xì)胞培養(yǎng)液
4． 輕輕沿著孔壁加入500 微升用戶自備的磷酸緩沖鹽溶液（PBS）到細(xì)胞培養(yǎng)孔，覆蓋培養(yǎng)孔表面
5． 小心抽去1 毫升磷酸緩沖鹽溶液（PBS）
6． 小心加入100 微升用戶自備的磷酸緩沖鹽溶液（PBS），覆蓋培養(yǎng)孔表面
2
7． 小心加入xx 微升染色液（Reagent A）
8． 輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)板，使其混勻
9． 室溫下孵育60 分鐘，避免光照（或37℃培養(yǎng)箱里孵育15 分鐘）
10．小心抽掉染色液
11．小心加入200 微升用戶自備的磷酸緩沖鹽溶液（PBS），覆蓋培養(yǎng)孔表面
12．即刻在倒置熒光顯微鏡下進(jìn)行觀察：
二、懸浮細(xì)胞染色
1． 將懸浮細(xì)胞（1 X 106 細(xì)胞）移入到1.5 毫升離心管
2． 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心10 分鐘，速度為300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）
3． 小心抽掉上清液
4． 加入500 微升用戶自備的磷酸緩沖鹽溶液（PBS），混勻細(xì)胞顆粒群
5． 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心10 分鐘，速度為300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）
6． 小心抽掉上清液
7． 加入100 微升用戶自備的磷酸緩沖鹽溶液（PBS），混勻細(xì)胞顆粒群
8． 加入xx 微升染色液（Reagent A），混勻
9． 室溫下孵育60 分鐘，避免光照（或37℃培養(yǎng)箱里孵育15 分鐘）
10．放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心10 分鐘，速度為300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）
11．小心抽掉上清液
12．加入100 微升用戶自備的磷酸緩沖鹽溶液（PBS），混勻細(xì)胞顆粒群
13．移出5 微升到載玻片上，放上蓋玻片
14．即刻在熒光顯微鏡下進(jìn)行觀察：
15．或即刻進(jìn)行細(xì)胞流式儀分析：
注意事項(xiàng)
1． 本產(chǎn)品為100 次操作
2． 本產(chǎn)品友好使用于雙重染色或重疊染色
3． 操作時(shí)須戴手套
4． 操作時(shí)，避免污染母液
5． 本產(chǎn)品適合各種規(guī)格的培養(yǎng)細(xì)胞：載玻片，載玻片培養(yǎng)皿，35mm 培養(yǎng)皿，和各種培養(yǎng)孔板，須相應(yīng)
調(diào)整試劑溶液：
操作容器試劑溶液規(guī)格
載玻片100 微升
載玻片培養(yǎng)皿100 微升
35mm 培養(yǎng)皿500 微升
96 孔培養(yǎng)板50 微升
48 孔培養(yǎng)板100 微升
24 孔培養(yǎng)板200 微升
12 孔培養(yǎng)板400 微升
6 孔培養(yǎng)板500 微升
25cm2 細(xì)胞培養(yǎng)瓶1 毫升
6． 本產(chǎn)品可用于懸浮細(xì)胞或細(xì)胞脫離處理后染色
7． 如果染色固定后的細(xì)胞，室溫下孵育時(shí)間15 分鐘
8． 孵育時(shí)，須避免光照
9． 建議細(xì)胞染色完成后，即刻進(jìn)行分析，不宜超過(guò)2 小時(shí)
10．細(xì)胞流式儀分析前，須混勻內(nèi)容物
11．細(xì)胞流式儀分析，細(xì)胞檢測(cè)量不得少于10000 個(gè)
12．本公司提供系列簡(jiǎn)易細(xì)胞核染色分析試劑產(chǎn)品
質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
1． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
2． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定熒光清晰