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糖蛋白電泳高碘酸希爾法阿爾新藍(lán)染色試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū) 

主要用途

糖蛋白電泳高碘酸希爾法阿爾新藍(lán)染色試劑是一種旨在通過(guò)阿爾新藍(lán)和高碘酸希爾方法的結(jié)合，所產(chǎn)生的藍(lán)色和紫紅色，來(lái)識(shí)別蛋白電泳中不同糖蛋白的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心改良傳統(tǒng)方法、成功實(shí)驗(yàn)證明的。主要適用于各種蛋白電泳分析中糖蛋白成分檢測(cè)。產(chǎn)品即到即用，操作簡(jiǎn)捷，性能穩(wěn)定，顯色清晰。

技術(shù)背景

阿爾新藍(lán)（alcian blue）染料是一種水溶性的銅酞菁基團(tuán)（cuprophthalocyanine group）的堿性染料。由于分子中銅的存在，而呈現(xiàn)藍(lán)色。在低pH的環(huán)境下，阿爾新藍(lán)與多價(jià)陰離子硫酸化（sulfated）和羧化（carboxylated）自由基的多價(jià)陰離子反應(yīng)，例如酸性粘多糖蛋白（acidic mucopolysaccharide）、唾液粘多糖蛋白（sialomucins）以及糖蛋白，和酸性基團(tuán)形成鹽鍵（salt linkage），呈現(xiàn)（通常高碘酸希爾法陰性）藍(lán)色。高碘酸（periodic acid）可以氧化糖蛋白中的多糖（polysaccharide）糖基，包括乙二醇（1,2-glycol）中的碳原子，成為乙醛基團(tuán)（aldehyde group），與希爾試劑（Schiff’s Reagent），即品紅亞硫酸鹽染料（fuchsin sulfite）發(fā)生反應(yīng)，呈現(xiàn)品紅色（magenda）或紫紅色，表明中性粘多糖蛋白陽(yáng)性。在糖蛋白電泳上，使用高碘酸希爾法阿爾新藍(lán)染色技術(shù)，可以檢測(cè)到25至100納克的糖蛋白。

產(chǎn)品內(nèi)容

固定液（Reagent A）  250毫升

染色液A（Reagent B）   50毫升

氧化液（Reagent C）   50毫升

染色液B（Reagent D）   50毫升

還原液（Reagent E）   50毫升

保存液（Reagent F）   50毫升

產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)    1份

保存方式

保存在4℃冰箱里；染色液A（Reagent B）和染色液B（Reagent D），嚴(yán)格密封瓶口，避免光照； 試劑具有腐蝕性，注意操作安全；有效保證6月

用戶自備

100毫升燒杯：用于配制工作液的容器

塑料盤：用于染色的容器

無(wú)離子水：用于稀釋試劑溶液

平式搖蕩儀：用于染色操作時(shí)的孵育

實(shí)驗(yàn)步驟

實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，完成SDS-PAGE蛋白電泳的運(yùn)行，取出6cm X 8cm 的膠體，作好定向標(biāo)記，然后進(jìn)行下列操作：

• 準(zhǔn)備6個(gè)100毫升的燒杯，作好1至6號(hào)標(biāo)記
• 移取50毫升固著液（Reagent A）到1號(hào)燒杯，加入50毫升用戶自備的無(wú)離子水，充分混勻
• 加入到8cm X 10cm 大小的染色盤
• 將聚丙烯酰胺凝膠放進(jìn)染色盤里
• 室溫下，在平式搖蕩儀上孵育30分鐘，速度為50RPM（注意：如果用戶需要暫停，可以過(guò)夜，但注意液體揮發(fā)）
• 小心倒掉染色盤里的固著液（Reagent A）
• 加入100毫升用戶自備的無(wú)離子水
• 室溫下，在平式搖蕩儀上孵育10分鐘，速度為50RPM
• 小心倒掉染色盤里的無(wú)離子水
• 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟7至9一次
• 移取10毫升染色液A（Reagent B）到2號(hào)燒杯，加入90毫升無(wú)離子水，充分混勻
• 加入上述配制的100毫升2號(hào)燒杯里稀釋的染色液A（Reagent B）到染色盤里
• 室溫下，在平式搖蕩儀上孵育60分鐘，速度為50RPM，或直至呈現(xiàn)藍(lán)色條帶為止，嚴(yán)格避免光照
• 小心倒掉染色盤里的染色液A（Reagent B）
• 加入100毫升用戶自備的無(wú)離子水
• 室溫下，在平式搖蕩儀上孵育10分鐘，速度為50RPM
• 小心倒掉染色盤里的無(wú)離子水
• 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟15至17二次
• 移取10毫升氧化液（Reagent C）到3號(hào)燒杯，加入90毫升無(wú)離子水，充分混勻
• 加入上述配制的100毫升3號(hào)燒杯里稀釋的氧化液（Reagent C）到染色盤里
• 室溫下，在平式搖蕩儀上孵育60分鐘，速度為50RPM
• 小心倒掉染色盤里的氧化液（Reagent C）
• 加入100毫升用戶自備的無(wú)離子水
• 室溫下，在平式搖蕩儀上孵育10分鐘，速度為50RPM
• 小心倒掉染色盤里的無(wú)離子水
• 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟23至25二次
• 移取10毫升染色液B（Reagent D）到4號(hào)燒杯，加入90毫升無(wú)離子水，充分混勻
• 加入上述配制的100毫升4號(hào)燒杯里稀釋的染色液B（Reagent D）到染色盤里
• 室溫下，在平式搖蕩儀上孵育60分鐘，速度為50RPM，或直至呈現(xiàn)品紅色條帶為止，嚴(yán)格避免光照
• 小心倒掉染色盤里的染色液B（Reagent D）
• 移取10毫升還原液（Reagent E）到5號(hào)燒杯，加入90毫升無(wú)離子水，充分混勻
• 加入上述配制的100毫升5號(hào)燒杯里稀釋的還原液（Reagent E）到染色盤里
• 室溫下，在平式搖蕩儀上孵育60分鐘，速度為50RPM，或直至背景清晰
• 小心倒掉染色盤里的還原液（Reagent E）
• 加入100毫升用戶自備的無(wú)離子水
• 室溫下，在平式搖蕩儀上孵育10分鐘，速度為50RPM
• 小心倒掉染色盤里的無(wú)離子水
• 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟35至37一次（注意：條帶更加清晰）
• 移取10毫升保存液（Reagent F）到6號(hào)燒杯，加入90毫升無(wú)離子水，充分混勻
• 加入上述配制的100毫升6號(hào)燒杯里稀釋的保存液（Reagent F）到染色盤里
• 室溫下，在平式搖蕩儀上孵育30分鐘，速度為50RPM，或過(guò)夜至次日處理
• 直至完成所有拍照和分析：呈現(xiàn)藍(lán)色或紫紅色為糖蛋白陽(yáng)性條帶

注意事項(xiàng)

• 本產(chǎn)品為5次（50至75個(gè)樣本）操作
• 操作時(shí)，須戴手套
• 所有操作在室溫下和通風(fēng)柜里進(jìn)行
• 試劑具有腐蝕性，注意操作安全
• 建議蛋白上樣量為30至100微克
• 染色液B（Reagent D）出現(xiàn)沉淀，可以溫?zé)?、攪拌或過(guò)濾后使用
• 染色液B（Reagent D）須密封避光，如果變成紅色，則影響染色效果
• 確保膠體浸泡在試劑液體里
• 染色時(shí)，嚴(yán)格避免光照
• 染色避免過(guò)度，肉眼可見(jiàn)深藍(lán)色或深紅色即可終止染色
• 染色通常20分鐘即可顯色，如果樣本濃度過(guò)低，可以增加染色時(shí)間至2小時(shí)
• 膠體如果達(dá)到1.5毫米厚，可以增加所有試劑處理時(shí)間一倍
• 本產(chǎn)品可以用于西方雜交的蛋白印跡膜的糖蛋白染色
• 本公司提供系列糖蛋白分析試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定顯色清晰