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通用型低密度脂蛋白膽固醇（LDL-Cholesterol）均相法酶連續(xù)循環(huán)比色法

定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書

主要用途

通用型低密度脂蛋白膽固醇（LDL-Cholesterol）均相法酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測試劑是一種旨在使用特定活性劑的情況下，通過膽固醇酯酶、膽固醇氧化酶和過氧化酶的酶連續(xù)反應(yīng)系統(tǒng)中產(chǎn)生的過氧化氫（H2O2），與氨基安替比林反應(yīng)，生成粉紅色的醌亞胺后吸光峰值的變化，即采用比色法來測定樣品中低密度脂蛋白膽固醇濃度的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心改良第三代均相（homogenous）直接檢測技術(shù)、成功實驗證明的。其適用于各種細胞、組織、血液、體液（動物、人體等）樣品中低密度脂蛋白膽固醇的濃度檢測。產(chǎn)品嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩(wěn)定，檢測敏感。

技術(shù)背景

膽固醇（cholesterol）是一類稱之為固醇類（sterols）或聚類異戊二烯（polyisoprenoid）或三萜皂甙元（triterpene）的多環(huán)化合物（polycyclic compound）。其分子式為cholest-5-en-3β-ol。膽固醇以游離（free form）和酯化結(jié)合（ester）兩種形式廣泛存在于所有動物體內(nèi)，主要以游離形式循環(huán)于血液中，以脂化形式傳運和貯存。其中脂蛋白在體內(nèi)血循環(huán)系統(tǒng)起著攜帶、轉(zhuǎn)運和儲存膽固醇的重要功能。根據(jù)與不同脂蛋白的結(jié)合，定義膽固醇為好（good）和壞（bad）膽固醇。脂蛋白分成五種類型：乳糜粒脂蛋白（Chylomicrons）、極低密度脂蛋白（very low density lipoprotein；VLDL）、低密度脂蛋白（low density lipoprotein；LDL）、中介密度脂蛋白（intermediate density lipoprotein；IDL）、和高密度脂蛋白（high density lipoprotein；HDL）。其中低密度脂蛋白由異源性和多分散性（polydisperse）顆粒組成，水化比重為1.006至1.063，是體內(nèi)含量多的膽固醇脂蛋白組分，主要功能在于在血液循環(huán)中轉(zhuǎn)運70%脂類物質(zhì)（例如甘油三酯），或從周邊細胞轉(zhuǎn)運膽固醇到肝臟。一旦含量增加，其患有動脈粥樣硬化、冠狀動脈疾病的風(fēng)險增加，并可以用于預(yù)測心臟疾病的發(fā)生。基于干擾性乳糜粒脂蛋白、極低密度脂蛋白、高密度脂蛋白酯化膽固醇（cholesterel ester）等受到特定表面活性劑Emulgen溶解，由膽固醇酯酶（cholesterol esterase）水解，轉(zhuǎn)化為游離膽固醇，進一步由膽固醇氧化酶（cholesterol oxidase）氧化產(chǎn)生過氧化氫（H2O2），后在過氧化氫酶（catalase）的催化下，得到去除（步驟一）。進而剩下的完整低密度脂蛋白膽固醇經(jīng)過特定去垢劑處理釋放，繼續(xù)與膽固醇酯酶和膽固醇氧化酶反應(yīng)，在過氧化酶（peroxidase）的催化下，過氧化氫與氨基安替比林（4-amino-antipyrine；AAP）反應(yīng)，生成粉紅色的醌亞胺（quinoneimine）后吸光峰值的變化（波長500nm），來定量測定低密度脂蛋白膽固醇的濃度（步驟二）。其酶連續(xù)反應(yīng)系統(tǒng)為：

步驟一

步驟二

產(chǎn)品內(nèi)容

緩沖液（Reagent A）  毫升

反應(yīng)液A（Reagent B）       毫升

反應(yīng)液B（Reagent C）       毫升

標準液（Reagent D）       微升

產(chǎn)品說明書   1份

保存方式

保存在－20℃冰箱里，反應(yīng)液B（Reagent C）和標準液（Reagent D）避免光照，有效保證6月

用戶自備

恒溫水槽或培養(yǎng)箱：用于孵育反應(yīng)

200微升1厘米光徑比色皿或96孔板：用于反應(yīng)和比色分析的容器

分光光度儀或酶標儀：用于比色分析

實驗步驟

實驗開始前，將－20℃冰箱里的試劑置入冰槽里融化。然后進行下列操作。

• 測定準備

• 準備好待測樣品，置于冰槽里備用
• 設(shè)定好酶標儀（溫度為37℃）：波長500nm
• 準備好5個1.5毫升離心管，標記為1至5號管

二、標準樣品測定

• 在96孔板上做好相應(yīng)標記
• 移取xx微升緩沖液（Reagent A）到相應(yīng)孔里
• 加入xx微升標準液（Reagent D）
• 加入xx微升反應(yīng)液B（Reagent C） 
• 輕輕搖動96孔板30秒
• 即刻放進酶標儀檢測：獲得初始吸光讀數(shù)（OD）
• 在37℃溫度下孵育2.5分鐘，避免光照
• 即刻放進酶標儀檢測：獲得終點吸光讀數(shù)（OD）
• 獲得實際吸光讀數(shù)：終點吸光讀數(shù)（OD）－初始吸光讀數(shù)（OD）

三、樣品測定

• 在96孔板上做好相應(yīng)標記：待測樣品
• 移取xx微升緩沖液（Reagent A）到相應(yīng)孔里
• 加入5微升待測樣品
• 加入xx微升反應(yīng)液A（Reagent B）
• 在37℃溫度下孵育5分鐘
• 加入xx微升反應(yīng)液B（Reagent C） 
• 輕輕搖動96孔板30秒
• 即刻放進酶標儀檢測：獲得初始吸光讀數(shù)（OD）
• 在37℃溫度下孵育2.5分鐘，避免光照
• 即刻放進酶標儀檢測：獲得終點吸光讀數(shù)（OD）
• 獲得實際吸光讀數(shù)：終點吸光讀數(shù)（OD）－初始吸光讀數(shù)（OD）
• 計算樣品濃度（毫克/分升）

• 濃度換算方法：

注意事項

• 本產(chǎn)品為20次操作，包括標準液
• 本產(chǎn)品的檢測范圍為1至400毫克/分升
• 本產(chǎn)品適宜于各種自動生化儀檢測
• 操作時，須戴手套
• 建議樣品保存在－70℃冰箱里，如果保存在4℃冰箱里，其穩(wěn)定性保持1周，－20℃保持3月
• 系統(tǒng)操作過程中，標準液測定只需1次
• 孵育反應(yīng)完成后即刻進行比色測定
• 樣品比色檢測可以使用分光光度儀和比色皿替代
• 比色測定后，使用比色皿的，須清洗*
• 如果用戶沒有匹配的濾波器，可以使用480nm至520nm之間的任一波長
• 如果待測樣品濃度過高或過低，可以調(diào)整樣品濃度
• 膽紅素（大于40毫克/分升）血紅蛋白（大于500毫克/分升）、甘油三酯（大于1000毫克/分升）、抗壞血酸（大于50毫克/分升）等會干擾檢測
• 正常血清低密度脂蛋白膽固醇的含量為小于或等于130毫克/分升（3.367毫摩爾）；高于160毫克/分升（4.144毫摩爾)則具有心血管疾病的風(fēng)險
• 本公司提供系列脂蛋白膽固醇檢測試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標準

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定檢測敏感