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熒光定量pcr測試劑盒反應(yīng)體系
閱讀：1452 發(fā)布時(shí)間：2013-8-3PCR檢測試劑盒反應(yīng)體系
SYBR Green I 是一種于小溝中的雙鏈 DNA 染料。與雙鏈 DNA 后，其熒光大大增強(qiáng)。這一性質(zhì)使其用于擴(kuò)增產(chǎn)品的檢測十分理想。 SYBR Green I 的大吸收波長約為 497nm ，發(fā)射波長大約為 520nm。在 PCR反應(yīng)系統(tǒng)中，參加過量 SYBR 熒光染料， SYBR 熒光染料特異性地?fù)饺?DNA 雙鏈后，發(fā)射熒光信號，而不摻入鏈中的 SYBR 染料分子不會發(fā)射任何熒光信號，然后確保熒光信號的添加與 PCR 產(chǎn)品的添加*同步。
SYBR Green I 在核酸的實(shí)時(shí)檢測方面有許多優(yōu)點(diǎn)，因?yàn)樗c一切的雙鏈 DNA 相，不用因?yàn)槟０宀灰粯佣裢舛ㄖ?，因而設(shè)計(jì)的程序通用性好，且價(jià)格相對較低。使用熒光染料能夠指示雙鏈 DNA 熔點(diǎn)的性質(zhì)，通過熔點(diǎn)曲線分析能夠辨認(rèn)擴(kuò)增產(chǎn)品和引物二聚體，因而能夠區(qū)別非特異擴(kuò)增，進(jìn)一步地還能夠完成單色多重測定。此外，因?yàn)橐粋€(gè) PCR 產(chǎn)品能夠與多分子的染料，因而 SYBR Green I 的靈敏度很高。可是，因?yàn)?SYBR Green I 與一切的雙鏈 DNA 相結(jié)合，因而由引物二聚體、單鏈二級布局以及過錯(cuò)的擴(kuò)增產(chǎn)品導(dǎo)致的假陽性會影響定量的性產(chǎn)生偏差。經(jīng)過測量升高溫度后熒光的改變能夠協(xié)助下降非特異產(chǎn)品的影響 。由解鏈曲線來剖析產(chǎn)品的均一性有助于剖析由 SYBR Green I 得到定量成果。
PCR檢測試劑盒反應(yīng)體系 2
LUX （light upon extention） 引物是利用熒光符號的引物完成定量的一項(xiàng)新技術(shù)。目標(biāo)特異的引物對中的一個(gè)引物 3’ 端用熒光報(bào)告基團(tuán)標(biāo)記。在沒有單鏈模板的情況下，該引物本身匹配，構(gòu)成發(fā)夾結(jié)構(gòu)，使熒光淬滅。在沒有目標(biāo)片斷的時(shí)候，引物與模板匹配，發(fā)夾結(jié)構(gòu)打開，產(chǎn)生特異的熒光信號。