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用于培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基類別有哪些并且它是由哪些成分組成的
閱讀:1021 發(fā)布時間:2013-9-27用于培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基類別有哪些并且它是由哪些成分組成的
緩沖系統(tǒng)細(xì)胞培養(yǎng)基
大多數(shù)細(xì)胞需要的pH值在7.2 -至7.4。但是,不同種類的細(xì)胞需要的PH值也是不一樣的。比如成纖維細(xì)胞喜歡較高pH (7.4至7.7),但是傳代轉(zhuǎn)化細(xì)胞系則需要偏酸pH (7.0 至7.4)。由于多數(shù)培養(yǎng)液靠碳酸氫鈉(NaHCO3)與CO2進(jìn)行緩沖,因此,氣相中的CO2濃度應(yīng)與培養(yǎng)液中碳酸氫鈉濃度一致。如果氣相或培養(yǎng)箱空氣中CO2濃度設(shè)定在5%,培養(yǎng)液中NaHCO3加入細(xì)胞的量為1.97g/L;如果CO2濃度保持在10%,培養(yǎng)液中NaHCO3的加入量為3.95g/L。需要細(xì)胞培養(yǎng)瓶蓋不應(yīng)擰得太緊,以保證氣體交換.。HEPES是一種非離子緩沖液,在pH 7.2 - 7.4范圍內(nèi)具有較好的緩沖能力,但是價格比較貴,在高濃度時可能對一些細(xì)胞會有毒。HEPES緩沖液可與低水平的碳酸鈉(0.34g/L)共用,來消除因額外加入HEPES引起的滲透壓增加。因此在這種條件下培養(yǎng),細(xì)胞培養(yǎng)瓶的蓋子要擰緊,防止培養(yǎng)液中少量的碳酸鹽揮發(fā)到空氣中。大多數(shù)培養(yǎng)液中是加入酚紅作為pH指示劑,酸性培養(yǎng)液呈橙黃色,堿性培養(yǎng)液呈深紅色。
維生素細(xì)胞培養(yǎng)基
在細(xì)胞培養(yǎng)中,盡管血清是維生素重要來源,但是許多培養(yǎng)基中添加了各種維生素以適合更多的細(xì)胞系生長。
其它成分細(xì)胞培養(yǎng)基
在一些比較復(fù)雜的培養(yǎng)液中還包括其它一些成分。例如在雜交瘤技術(shù)中常用的DMEM培養(yǎng)液,使用時還需要補(bǔ)加丙酮酸鈉和qiu基乙醇。2-Me對細(xì)胞生長起到很重要的作用,有人認(rèn)為它相當(dāng)于胎牛血清,有直接刺激細(xì)胞增殖的作用。2-Me的活性部分是硫氫基,其中一個重要作用是使血清中含硫的化合物還原成谷胱甘肽,能誘導(dǎo)細(xì)胞的增殖,為非特異性的激活作用。同時避免過氧化物對培養(yǎng)細(xì)胞的損害。另一個重要作用是促進(jìn)分裂原的反應(yīng)和DNA合成,增加植物凝集素(PHA)對淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化作用,已廣泛應(yīng)用于雜交瘤技術(shù)。另外,也開始用于一些難以培養(yǎng)的細(xì)胞。2-Me是一種小分子還原劑,極易氧化。分子量為78.13純的2-Me是一種無色有刺激味的液體,比重為1.110-1.120(Do20),常用終濃度為5×10-5M。常配制成0.1M的儲存液,用時每升培養(yǎng)液加0.5ml。