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如何8小時(shí)內(nèi)在單塊孔板中篩選上百萬(wàn)個(gè)B細(xì)胞？
抗體是理想的治療性生物大分子，不但能與各種靶點(diǎn)結(jié)合，且具有高親和力和特異性。隨著雜交瘤和噬菌體展示技術(shù)的創(chuàng)新，藥物研發(fā)人員能夠利用抗體的天然多樣性，廣泛使用單克隆抗體（mAbs）治療癌癥、慢性炎癥和傳染病。
作為抗體開發(fā)上游的關(guān)鍵技術(shù)環(huán)節(jié)，單B 細(xì)胞篩選技術(shù)已經(jīng)有了顯著發(fā)展，并成為獲取抗原特異性mAb 序列的主要來(lái)源。然而，這一技術(shù)仍然面臨諸多挑戰(zhàn)，如：開發(fā)效率低、成本高昂等問(wèn)題。
只需一臺(tái)Incucyte®實(shí)時(shí)活細(xì)胞分析系統(tǒng)，結(jié)合CellTraxx 軟件便可自動(dòng)對(duì)細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)和形態(tài)進(jìn)行高通量、實(shí)時(shí)的無(wú)標(biāo)記追蹤，輕松為每一個(gè)細(xì)胞都裝上“GPS”，讓您的研究跳脫傳統(tǒng)束縛，邁入高效率的新時(shí)代。
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高效可靠的新型單細(xì)胞分離技術(shù)
基于納米孔陣列和圖像驗(yàn)證的高通量克隆篩選（HT-NIC）技術(shù)基于CellCelector納米孔板，每個(gè)大孔底部都有多達(dá)數(shù)十萬(wàn)個(gè)納米孔，能夠有效地對(duì)成千上萬(wàn)個(gè)單細(xì)胞進(jìn)行分離，同時(shí)確保細(xì)胞被相同的培養(yǎng)基覆蓋，因此可以共享生長(zhǎng)因子，在共培養(yǎng)環(huán)境下更容易生長(zhǎng)至克隆。
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全面加速的B細(xì)胞篩選流程
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靈活經(jīng)濟(jì)的B細(xì)胞篩選方案
CellCelector支持明場(chǎng)、相差以及藍(lán)色、綠色、紅色、遠(yuǎn)紅外和近紅外熒光通道成像以進(jìn)行分泌物多重分析。對(duì)納米孔板中的單個(gè)細(xì)胞進(jìn)行單細(xì)胞分泌分析，能夠快速識(shí)別理想的分泌細(xì)胞。CellCelector B細(xì)胞工作流程支持多種細(xì)胞分析策略，包括使用抗原包被孔板、加入微球或抗原表達(dá)報(bào)告細(xì)胞的分析策略。
圖1. CellCelector B細(xì)胞工作流程和基于納米孔的分泌測(cè)定示意圖
CellCelector B細(xì)胞篩選可使用H100型（六邊形）納米孔板，每個(gè)大孔包含60,000個(gè)納米孔，且具有無(wú)細(xì)胞毒性和低黏附性的特點(diǎn)，防止細(xì)胞附著，不受細(xì)胞的粘附性或懸浮條件優(yōu)化的影響，可有效分離單個(gè)B細(xì)胞并進(jìn)行分泌物檢測(cè)。
圖2. H100六邊形納米孔板
圖3. 孔板內(nèi)包被抗原的B 細(xì)胞分泌分析方案
圖4. 微球和報(bào)告細(xì)胞的單B 細(xì)胞篩選方案
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可視化篩選和挑取過(guò)程
使用CellCelector 分離和表征原代B細(xì)胞。使用明場(chǎng)和熒光掃描52,000個(gè)納米孔，鑒定含有分泌抗體（AF647+）的B細(xì)胞且對(duì)EGFR結(jié)合呈陽(yáng)性（AF488+）的B細(xì)胞納米孔。（A）熒光特異性647nm發(fā)射的圖像（紅色）；含有抗體分泌細(xì)胞的兩個(gè)鄰近孔可以觀察到三個(gè)紅色熒光孔，表示它們分泌了目標(biāo)抗體（ASC）。（B）熒光特異性488nm發(fā)射的圖像（綠色）；一個(gè)含有EGFR特異性ASC的鄰近孔兩個(gè)綠色的孔代表其分泌物能夠和EGFR結(jié)合。（C）來(lái)自647和488nm通道的圖像疊加和（D）用于挑取EGFR+ASC的明場(chǎng)圖像。從納米孔挑取EGFR+ASC之前和之后的明場(chǎng)圖像（E）和（F）挑取前后的明場(chǎng)圖像顯示納米孔內(nèi)所有的內(nèi)容物均已挑取。
圖5. 細(xì)胞分泌分析示例[1]
總結(jié)
傳統(tǒng)B細(xì)胞篩選 | CellCelector B細(xì)胞篩選 |
費(fèi)時(shí)費(fèi)力、效率低下且成本高昂 | 使用自動(dòng)化分析和分離流程，僅需一塊納米孔板即可實(shí)現(xiàn)上萬(wàn)個(gè)單B細(xì)胞篩選，高效且節(jié)約 |
需要引入多種分析工具篩選單B細(xì)胞，并評(píng)估B細(xì)胞性能和產(chǎn)量 | 基于HT-NIC方法，在單次分析流程中即可對(duì)B細(xì)胞分泌物特異性及產(chǎn)量進(jìn)行評(píng)估，并有效回收分離 |
操作復(fù)雜，需要專業(yè)操作人員 | 高度集成的自動(dòng)化流程減少人力投入，操作簡(jiǎn)便
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提高臨床和生物治療研究及
抗體開發(fā)中 B 細(xì)胞工作流程的效率
下載文檔
-參考文獻(xiàn)-
[1] Matacho et al. (2022). Antibody Therapeutics, Volume 5, Issue 1, January 2022, Pages 11–17