促腎上腺皮質(zhì)激素

放免疫分析藥盒說明書

Adrenocorticotropic Hormone Radioimmunoassay Kit

一、概述及研究意義

ACTH是由垂體前葉細(xì)胞分泌的39個(gè)氨基酸組成的直鏈多肽，分子量4500，在循環(huán)中的半衰期僅為10~25min。ACTH的作用為促進(jìn)腎上腺皮質(zhì)增生、合成和分泌皮質(zhì)類固醇，同時(shí)也促時(shí)腎上腺素、生長激素合成。ACTH的合成和分泌受下丘腦促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素(CRH)、腎上腺皮質(zhì)激素以及加壓素的調(diào)節(jié)。我們利用ACTH的18~39片段的特異抗體，建立了特異、靈敏的測(cè)定血漿、體液中ACTH18-39片段的放射免疫分析方法。該抗體也能同組織、細(xì)胞切片中特異的ACTH和體外純化的ACTH特異結(jié)合，用于研究組織化學(xué)診斷ACTH水平變化。因此該方法適用于腎上腺皮質(zhì)功能亢進(jìn)、異位ACTH綜合征、腎上腺腺瘤上腺皮質(zhì)功能減退等諸多研究疾病時(shí)血漿ACTH水平的監(jiān)測(cè)。

二、測(cè)定原理

應(yīng)用競(jìng)爭(zhēng)機(jī)制原理，標(biāo)準(zhǔn)或樣品中的ACTH和加入的¹²⁵I- ACTH 共同與一定量的特異性抗體產(chǎn)生競(jìng)爭(zhēng)性免疫反應(yīng)。¹²⁵I -ACTH與抗體的結(jié)合量與標(biāo)準(zhǔn)或樣品中ACTH的含量呈一定的函數(shù)關(guān)系。用免疫分離試劑（P.R.）

將結(jié)合部分（B）與游離部分（F）分離后，測(cè)定結(jié)合部分的放射性強(qiáng)度，

并計(jì)算相應(yīng)結(jié)合率B/B₀。用已知標(biāo)準(zhǔn)ACTH含量與對(duì)應(yīng)結(jié)合率作圖，即得

標(biāo)準(zhǔn)抑制曲線。從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出對(duì)應(yīng)結(jié)合率的待測(cè)樣品中的含量。

三、試劑盒組成

四、試劑的配制、使用方法和保存

1. 標(biāo)準(zhǔn)ACTH 溶液：使用前用緩沖液1ml溶解，混勻。2~8℃避光保存，在標(biāo)識(shí)的有效期內(nèi)穩(wěn)定，濃度分別為0、5、15、45、135、405pg/ml。
2. ¹²⁵I- ACTH溶液：使用前用緩沖液(100管10.5ml溶解，50管5.5ml

溶解)，混勻。如一次加樣超過100管，兩瓶混合后使用；2~8℃避光保存標(biāo)識(shí)的有效期內(nèi)穩(wěn)定。

1. 兔抗-ACTH  抗血清：使用前用緩沖液(100管10.5ml溶解，50管5.5ml

溶解)，混勻。如一次加樣超過100管，兩瓶混合后使用；2~8℃避光保存標(biāo)識(shí)的有效期內(nèi)穩(wěn)定。

1. 驢抗兔免疫分離試劑：1瓶，液體，2~8℃保存，在標(biāo)識(shí)的有效期內(nèi)穩(wěn)定。加樣前必須搖勻！

• 樣本處理

取靜脈血2ml，注入含10%EDTA二鈉30ul的試管中，混勻4℃,3000rpm離心10 min,分離血漿，待測(cè)；如不立即測(cè)量，可將樣本密封后，置于2~8℃或-20℃儲(chǔ)存?zhèn)錅y(cè)，2~8℃保存不應(yīng)超過48小時(shí)，-20℃保存不超過2個(gè)月。冰凍樣品測(cè)定前，使樣本置于室溫或冷水中復(fù)融，再次4℃,3000rpm離心5 min,取上清測(cè)定。

• 測(cè)定步驟

取圓底聚苯乙烯試管若干，用記號(hào)筆或特殊鉛筆編號(hào)NSB，S₀—S₆和待測(cè)樣品管等，然后用微量取樣器按下表加樣。

操作程序表                                          （單位：μl）

• 數(shù)據(jù)處理

1. 聯(lián)機(jī)處理:由電腦自動(dòng)處理得出結(jié)果。注意放射免疫方法和免疫放射方法由于原理不同，處理軟件也不一樣，用戶一定要使用適合的處理

軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。在此建議用戶使用logit-log或四參數(shù)數(shù)據(jù)處理模式。

1. 手工作圖或計(jì)算器處理:

1).百分結(jié)合率計(jì)算：設(shè)S₀管計(jì)數(shù)為B₀，各標(biāo)準(zhǔn)管或樣品管計(jì)數(shù)為B，非特異管計(jì)數(shù)為NSB，則百分結(jié)合率計(jì)算公式如下：B/ B₀=(B－NSB)/( B₀－NSB)×100%

2).logit計(jì)算:各標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)或樣品管的logit值計(jì)算公式如下:

    logit=ln(B/ B₀)/(1－B/ B₀)

3)手工作圖：以標(biāo)準(zhǔn)濃度取log值為橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的logit值為縱坐標(biāo)在普通坐標(biāo)紙上或以標(biāo)準(zhǔn)濃度為橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的B/B₀為縱坐標(biāo)在logit-log坐標(biāo)紙上畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線（理想化時(shí)是一條直線）。根據(jù)待測(cè)樣品的B/B₀可以從坐標(biāo)紙上查出樣品的濃度值。注意：如果使用普通坐標(biāo)紙，查出的數(shù)值應(yīng)取反對(duì)數(shù)才是zui后的濃度值。

4).計(jì)算器處理；使用有線性擬合功能的計(jì)算器，可以比較方便地計(jì)算出樣品濃度值，具體操作方法請(qǐng)查閱計(jì)算器的使用說明書。如果用戶需要可以和北方所，我們可以向您提供使用方法。

標(biāo)準(zhǔn)曲線舉例（僅供參考，不得用于實(shí)際計(jì)算）。

• 本測(cè)定盒主要技術(shù)指標(biāo)

1. 標(biāo)準(zhǔn)范圍：5—405pg/ml
2. 靈敏度：<5pg/ml
3. 批內(nèi)變異系數(shù)（CV）：<10%;

 批間變異系數(shù)（CV）：<15%

1. 使用期限：見產(chǎn)品外包裝。

• 參考正常值：
  1. 測(cè)定本所工作人員20例(21-45歲)早8：00血漿中ACTH濃度為7.9-32.1pg/ml均值17.3±5.73pg/ml;下午16：00血漿中ACTH濃度為10.7-30.5pg/ml，均值18.4±5.6pg/ml。
  2. 測(cè)定門診查體人群202例(14-76歲)，早晨空腹血清中ACTH

濃度為5.08-32.86pg/ml,均值14.56±6.22pg/ml。

由于地區(qū)及使用儀器不同,所測(cè)的正常值會(huì)存在一定的差異,所以本說明書提供的正常值僅作參考.各實(shí)驗(yàn)室能建立符合本實(shí)驗(yàn)室要求的正常值范圍。

• 注意事項(xiàng)

1. 收到試劑盒后，盡快存放在2~8℃；凍干品溶解后，應(yīng)保存在2~8℃條件下，不要反復(fù)凍融。
2. ¹²⁵I- ACTH一次使用不完時(shí)，可先用少量緩沖液溶解，分成若干支，-20℃保存，一次使用一支。
3. 實(shí)驗(yàn)前全部試劑應(yīng)放置室溫下平衡。
4. 本產(chǎn)品組份分為兩類，即液體組份、 凍干組份。液體組份標(biāo)簽上的有效期是指未開蓋、開封時(shí)當(dāng)儲(chǔ)存條件符合標(biāo)簽要求時(shí)的有效期限，但開蓋開封后的有效期zui多為45天（具體期限見本產(chǎn)品說明書有關(guān)說明）； 凍干組份標(biāo)簽上的儲(chǔ)存條件是指復(fù)溶后應(yīng)采用的儲(chǔ)存條件，而有效期是指未復(fù)溶條件下當(dāng)儲(chǔ)存條件符合標(biāo)簽時(shí)的有效期限，復(fù)溶后的有效期限在標(biāo)簽規(guī)定的儲(chǔ)存條件下zui多為45天（具體期限見本產(chǎn)品說明書有關(guān)說明）。

• 參考文獻(xiàn)
  1. 李振甲“激素的放射免疫分析“科學(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社 1985。
  2. Atsushi Tagaki etal核醫(yī)學(xué)（日）15：275，1978
  3. Brrr WA et al:Lancet 2:12277,1975
  4. Chopraij:Clin Invest 54:583,1974
  5. Kenneth Detal:Jclin Endccrinol Metab 44:660,1977