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破骨細(xì)胞骨吸收檢測(cè)操作流程

閱讀:551      發(fā)布時(shí)間:2024-7-19
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骨切片Bone Slice

產(chǎn)品描述:

開(kāi)始骨吸收實(shí)驗(yàn)前用培養(yǎng)基重懸骨切片,成熟或早熟的破骨細(xì)胞,無(wú)論是由外周血單核細(xì)胞(PBMC)或共培養(yǎng)產(chǎn)生的,都可以將細(xì)胞分散覆蓋于骨切片上。根據(jù)破骨細(xì)胞的成熟形態(tài)和影響因素,凹點(diǎn)會(huì)在3-14天出現(xiàn)。破骨細(xì)胞數(shù)量可通過(guò)Tracp 活性實(shí)驗(yàn)來(lái)觀察,吸收凹點(diǎn)和溝可通過(guò)甲苯藍(lán)染色觀察(如圖2.)。

1-1.png

來(lái)源:骨切片由牛股骨的皮質(zhì)部分制成,適合96孔板,直徑6mm。

厚度:1)0.2mm(適用于免疫熒光,共聚焦實(shí)驗(yàn))。
       
2)0.4mm(適用于下游分析)
儲(chǔ)存:置于4°C下96%乙醇中。
應(yīng)用:用于骨吸收實(shí)驗(yàn)檢測(cè),通過(guò)破骨細(xì)胞的骨吸收形成的吸收坑,可以用來(lái)監(jiān)測(cè)培養(yǎng)的破骨細(xì)胞的骨吸收情況,適合96孔板。

操作流程:

骨吸收實(shí)驗(yàn)

簡(jiǎn)介:

該方法提供一種易于檢測(cè)的定量方案,用于體外測(cè)定破骨細(xì)胞介導(dǎo)的骨吸收。破骨細(xì)胞接種于骨切片上,吸收坑的形成可以通過(guò)甲苯胺藍(lán)染色進(jìn)行定量。

實(shí)驗(yàn)材料和試劑:

1)  破骨細(xì)胞

2)  骨切片

3)  異丙醇

4)  甲苯胺藍(lán)(Sigma cat#198161

5)  超純水

6)  96孔細(xì)胞培養(yǎng)板(Greiner , Cat#650185

實(shí)驗(yàn)設(shè)備:

1.       骨形態(tài)測(cè)量系統(tǒng)

2.       超聲波清洗器

操作流程:

1.       破骨細(xì)胞接種于(250000 細(xì)胞/孔)含和不含顱骨成骨細(xì)胞的96孔細(xì)胞培養(yǎng)板上(提前孔內(nèi)放置骨切片)。

2.       細(xì)胞在合適的培養(yǎng)基中37℃培養(yǎng)至少14天。

3.       此后,用PBS洗滌細(xì)胞兩次,在250ul 70%異丙醇中,用超聲波高功率處理至少15分鐘,使細(xì)胞從骨切片脫落。

注意:250ul 70%異丙醇處理使細(xì)胞更容易從骨切片脫落。

4.       加入100ul 甲苯胺藍(lán)溶液(1%溶解于水),室溫染色2分鐘。

5.       250ul 超純水沖洗骨切片至少5次,以洗掉切片上的殘留物。

6.       吸收坑被染成深藍(lán)色(圖1),吸收坑面積可以通過(guò)骨測(cè)量系統(tǒng)進(jìn)行量化或者吸收坑可通過(guò)光學(xué)顯微鏡觀察計(jì)數(shù)。

008.jpg

產(chǎn)品訂購(gòu):

品牌

英文名稱

中文名稱

貨號(hào)

規(guī)格

Bone slice

Bone Slice

骨切片

250

50片(200um)

Bone slice

Bone Slice

骨切片

200

50片(400m)

IDS

Bone slice

Bone Slices

DT-1BON1000-96


 







更多產(chǎn)品詳情,請(qǐng)聯(lián)系Bone Slice 中國(guó)區(qū)總代理北京博蕾德生物科技有限公司。

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