骨切片Bone Slice
產(chǎn)品描述:
開(kāi)始骨吸收實(shí)驗(yàn)前用培養(yǎng)基重懸骨切片,成熟或早熟的破骨細(xì)胞,無(wú)論是由外周血單核細(xì)胞(PBMC)或共培養(yǎng)產(chǎn)生的,都可以將細(xì)胞分散覆蓋于骨切片上。根據(jù)破骨細(xì)胞的成熟形態(tài)和影響因素,凹點(diǎn)會(huì)在3-14天出現(xiàn)。破骨細(xì)胞數(shù)量可通過(guò)Tracp 活性實(shí)驗(yàn)來(lái)觀察,吸收凹點(diǎn)和溝可通過(guò)甲苯藍(lán)染色觀察(如圖2.)。
來(lái)源:骨切片由牛股骨的皮質(zhì)部分制成,適合96孔板,直徑6mm。
厚度:1)0.2mm(適用于免疫熒光,共聚焦實(shí)驗(yàn))。
2)0.4mm(適用于下游分析)
儲(chǔ)存:置于4°C下96%乙醇中。
應(yīng)用:用于骨吸收實(shí)驗(yàn)檢測(cè),通過(guò)破骨細(xì)胞的骨吸收形成的吸收坑,可以用來(lái)監(jiān)測(cè)培養(yǎng)的破骨細(xì)胞的骨吸收情況,適合96孔板。
操作流程:
骨吸收實(shí)驗(yàn)
簡(jiǎn)介:
該方法提供一種易于檢測(cè)的定量方案,用于體外測(cè)定破骨細(xì)胞介導(dǎo)的骨吸收。破骨細(xì)胞接種于骨切片上,吸收坑的形成可以通過(guò)甲苯胺藍(lán)染色進(jìn)行定量。
實(shí)驗(yàn)材料和試劑:
1) 破骨細(xì)胞
2) 骨切片
3) 異丙醇
4) 甲苯胺藍(lán)(Sigma cat#198161)
5) 超純水
6) 96孔細(xì)胞培養(yǎng)板(Greiner , Cat#650185)
實(shí)驗(yàn)設(shè)備:
1. 骨形態(tài)測(cè)量系統(tǒng)
2. 超聲波清洗器
操作流程:
1. 破骨細(xì)胞接種于(250000 細(xì)胞/孔)含和不含顱骨成骨細(xì)胞的96孔細(xì)胞培養(yǎng)板上(提前孔內(nèi)放置骨切片)。
2. 細(xì)胞在合適的培養(yǎng)基中37℃培養(yǎng)至少14天。
3. 此后,用PBS洗滌細(xì)胞兩次,在250ul 70%異丙醇中,用超聲波高功率處理至少15分鐘,使細(xì)胞從骨切片脫落。
注意:250ul 70%異丙醇處理使細(xì)胞更容易從骨切片脫落。
4. 加入100ul 甲苯胺藍(lán)溶液(1%溶解于水),室溫染色2分鐘。
5. 用250ul 超純水沖洗骨切片至少5次,以洗掉切片上的殘留物。
6. 吸收坑被染成深藍(lán)色(圖1),吸收坑面積可以通過(guò)骨測(cè)量系統(tǒng)進(jìn)行量化或者吸收坑可通過(guò)光學(xué)顯微鏡觀察計(jì)數(shù)。
產(chǎn)品訂購(gòu):
品牌 | 英文名稱 | 中文名稱 | 貨號(hào) | 規(guī)格 |
Bone slice | Bone Slice | 骨切片 | 250 | 50片(200um) |
Bone slice | Bone Slice | 骨切片 | 200 | 50片(400m) |
IDS | Bone slice | Bone Slices | DT-1BON1000-96 |
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