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一種從熱帶木本植物中無(wú)毒組織研磨提取核酸的方法
閱讀：4539發(fā)布時(shí)間：2019-12-19
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木本熱帶植物中含有大量復(fù)雜的有機(jī)化合物，這些有機(jī)化合物會(huì)抑制提取RNA或DNA所需的化學(xué)程序，從而不利于后續(xù)研究及應(yīng)用，如RNA測(cè)序和基因表達(dá)分析。為了克服這個(gè)問(wèn)題，研究人員必須使用CTAB / PVP緩沖液的提取方案，而不能使用市售的DNA / RNA提取試劑盒。但是，這種提取方式耗時(shí)長(zhǎng)、需使用有毒化學(xué)品（例如苯酚和CHCl3），并且一次只能處理少量樣品。為了克服這些問(wèn)題，我們開(kāi)發(fā)了一種基于CTAB / PVP的新方法，用于RNA或DNA提取，去掉了傳統(tǒng)方法中的苯酚/CHCl3步驟。此外，該方法同樣適用于96孔深孔板，使用SPEX高通量組織研磨儀，一次研磨6塊深孔板，同時(shí)處理576個(gè)樣品，大大加快了處理速度。
我們的新方法，能夠從夏威夷果、牛油果和芒果組織中，成功提取RNA，這些組織使用傳統(tǒng)方法很難提取到RNA。而后我們還驗(yàn)證了，該方法提取的RNA成功地合成cDNA，以進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR并生成高質(zhì)量的RNA-Seq庫(kù)。該方法經(jīng)輕微改動(dòng)后，可用于從不同的熱帶和亞熱帶樹(shù)種中快速提取DNA。
這種方法可以更安全、更快速地從困難樣品中提取DNA和RNA，從而為將來(lái)在熱帶樹(shù)木上的研究提供了便利。
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