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【ISCO】將TLC與等度洗脫分離相關(guān)聯(lián)Rf到CV轉(zhuǎn)換
閱讀：1058發(fā)布時間：2024-9-24
在使用Teledyne ISCO的CombiFlash®系統(tǒng)時，或者在純化沒有色團(tuán)的化合物時，可以使用薄層色譜法（TLC）來定位收集到的餾分中的純化化合物。
如果已知化合物的保留因子（Rf），則可以根據(jù)柱體積估計含有所需物質(zhì)的餾分收集管。柱體積是裝填柱的空隙（空余）體積。這一規(guī)格在所有RediSep®色譜柱的色譜應(yīng)用說明3中都有列出。
了解Rf和柱體積可以讓您大致了解化合物可能位于哪些餾分收集管的范圍。
二、一般方法
將待分離的化合物加載到TLC板上，并分離成幾個種類。
控制參數(shù)
TLC的幾個參數(shù)必須保持一致以獲得良好的相關(guān)性。
• TLC溶劑應(yīng)以體積比的方式量取，以便混合物在轉(zhuǎn)移到梯度生成系統(tǒng)時保持恒定。
• 為了獲得最佳結(jié)果，建議對層析室和板進(jìn)行平衡。
• 推薦將板運(yùn)行至距離板頂部1-4厘米以內(nèi)，以實(shí)現(xiàn)良好的分離。
• 在運(yùn)行板之前，應(yīng)標(biāo)記樣品斑點(diǎn)位置和溶劑水平。
• 應(yīng)在運(yùn)行結(jié)束時標(biāo)記溶劑洗脫高度和樣品斑點(diǎn)位置。
• 在進(jìn)行TLC時，層析室中的溶劑水平絕不能觸及樣品，并且應(yīng)覆蓋層析室以維持氣相中的平衡。
假設(shè)
有幾個假設(shè)：
• 色譜柱和TLC板使用相同類型的固定相。
• TLC方法中使用的溶劑與液體分離中使用的溶劑相同。
因此，液體分離必須是等度洗脫。
• TLC的Rf應(yīng)小于0.5且大于0.1，如果不是這樣，則可能需要不同的溶劑系統(tǒng)。
Rf值
Rf — 保留因子。樣品斑點(diǎn)移動的距離。Rf通過以下公式計算：
Zx — 斑點(diǎn)從其起始點(diǎn)（樣品線）移動的距離。請參考圖1和圖2。
Zf — 從原始溶劑線到最終溶劑前沿的距離。
Z0 — 從溶劑線到樣品線的距離。
圖1：TLC起始
圖2：TLC完成
柱體積相關(guān)性
一旦知道了混合物中某個組分的Rf，就可以與柱體積（CV）建立相關(guān)性。
如果Rf值在0.1和0.5之間，它可以被輸入到以下公式中，以給出收集管的范圍。
其中：
Volc — 柱的空隙體積。
Volf — 每個管中收集的餾分體積。
三、示例
請參考圖3。
圖3：TLC示例
一個丙酮斑點(diǎn)洗脫了62毫米（Zx=62毫米），溶劑水平到水平樣品線的距離是8毫米（Z0=8毫米），溶劑前沿移動的距離是170毫米（Zf=170毫米）。Rf是無量綱的，所以單位被省略，進(jìn)行計算：
為了將這與通過柱體積為16.8 mL的12克RediSep柱進(jìn)行的純化相關(guān)聯(lián)，并收集為10 mL的餾分，將Rf應(yīng)用到以下公式中：
四、計算機(jī)
人們可以輕松使用Microsoft® Excel®或其他電子表格程序來創(chuàng)建Rf和試管相關(guān)性計算器：
圖4：Rf和試管相關(guān)性計算器
五、參考
Colin F. Poole and Salwa K. Poole, “Chromatography Today", Elsevier Science Publishers B.V., 649-667, (1991).
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