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技術(shù)文章

有機(jī)肥蛔蟲(chóng)卵死亡率如何檢測(cè)?

閱讀:1639          發(fā)布時(shí)間:2021-7-13

肥料中蛔蟲(chóng)卵死亡率的測(cè)定    GB/T 19524.2—2004  

1 范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了肥料中蛔蟲(chóng)卵死亡率的測(cè)定方法。

2 測(cè)定方法原理

將堿性溶液與肥料樣品充分混合,分離蛔蟲(chóng)卵,然后用密度較蛔蟲(chóng)卵密度大的溶液為漂浮液,使蛔蟲(chóng)卵漂浮在溶液的表面,從而收集檢驗(yàn)。

3  試驗(yàn)方法

3.1  儀器設(shè)備:騰宇儀有機(jī)肥檢測(cè)設(shè)備

3.2  試劑:騰宇儀專(zhuān)用試劑

3.3   檢驗(yàn)程序:02

3.3.1  蛔蟲(chóng)卵分離

稱(chēng)取5.010.0g樣品(顆粒較大的樣品應(yīng)*行研磨),放于容量為50mL離心管中,注入NaOH溶液2530mL另加玻璃珠約10粒,用橡皮塞塞緊管口,放置在振蕩器上,靜置30min后,以200300r/min頻率振蕩1015min。振蕩完畢,取下離心管上的橡皮塞,用玻璃棒將離心管中的樣品充分?jǐn)噭?,再次用橡皮塞塞緊管口,靜置1530min 后,振蕩1015min。

3.3.2  離心沉淀

從振蕩器上取下離心管,拔掉橡皮塞,用滴管吸取蒸餾水,將附著于橡皮塞上和管口內(nèi)壁的樣品沖入管中,以20002500r/min速度離心35min后,棄去上清液。然后加適量蒸餾水,并用玻璃棒將沉淀物攪起,按上述方法重復(fù)洗滌三次。

3.3.3  離心漂浮

往離心管中加入少量飽和NaNO3溶液,用玻璃棒將沉淀物攪成糊狀后,再徐徐添加飽和NaNO3溶液,隨加隨攪,直加到離管口約1cm為止,用飽和NaNO3溶液沖洗玻璃棒,洗液并入離心管中,以20002500r/min速度離心35min。

用金屬絲圈不斷將離心管表層液膜移于盛有半杯蒸餾水的燒杯中,約30次后,適當(dāng)增加一些飽和NaNO3溶液于離心管中,再次攪拌、離心及移置液膜,如此反復(fù)操作3~4次,直到液膜涂片觀察不到蛔蟲(chóng)卵為止。

3.3.4       抽濾鏡檢

將燒杯中混合懸液,通過(guò)覆以微孔火棉膠濾膜的高爾特曼氏漏斗抽濾。若混合懸液的渾濁度大,可更換濾膜。

抽濾完畢,用彎頭鑷子將濾膜從漏斗的濾臺(tái)上小心取下,置于載玻片上,滴加二、三滴甘油溶液,于低倍顯微鏡下對(duì)整張濾膜進(jìn)行觀察和蛔蟲(chóng)卵計(jì)數(shù)。當(dāng)觀察有蛔蟲(chóng)卵時(shí),將含有蛔蟲(chóng)卵的濾膜進(jìn)行培養(yǎng)。

3.3.5       培養(yǎng)

在培養(yǎng)皿的底部平鋪一層厚約1cm的脫脂棉,脫脂棉上鋪一張直徑與培養(yǎng)皿相適的普通濾紙。為防止霉菌和原生動(dòng)物的繁殖,可加入甲醛溶液或甲醛生理鹽水,以浸透濾紙和脫脂棉為宜。

將含蛔蟲(chóng)卵的濾膜平鋪在濾紙上,培養(yǎng)皿加蓋后置于恒溫培養(yǎng)箱中,在2830條件下培養(yǎng),培養(yǎng)過(guò)程中經(jīng)常滴加蒸餾水或甲醛溶液,使濾膜保持潮濕狀態(tài)。

3.3.6  鏡檢

培養(yǎng)1015d,自培養(yǎng)皿中取出濾膜置于載玻片上,滴加甘油溶液,使其透明后,在低倍鏡下查找蛔蟲(chóng)卵,然后在高倍鏡下根據(jù)形態(tài),鑒定卵的死活,并加以計(jì)數(shù)。鏡檢時(shí)若感覺(jué)視野的亮度和膜的透明度不夠,可在載玻片上滴一滴蒸餾水,用蓋玻片從濾膜上刮下少許含卵濾渣,與水混合均勻,蓋上蓋玻片進(jìn)行鏡檢。

3.3.7  判定

凡含有幼蟲(chóng)的,都認(rèn)為是活卵,未孵化或單細(xì)胞的都判為死卵。

3.3.8       結(jié)果計(jì)算

K=100(N1-N2)/ N1

式中:

K蛔蟲(chóng)卵死亡率%

N1鏡檢總卵數(shù) 

N2培養(yǎng)后鏡檢活卵數(shù)

 

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