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離心式脫鹽柱的使用步驟

2014-8-25  閱讀(13792)

G-Biosciences離心式脫鹽柱Spin-OUT GT-1200 Medi的使用步驟

http://img0.ph.126.net/b30gdAOvPbQ2u_bubQzodA==/618681998827940844.jpghttp://img0.ph.126.net/s9U2Xo8Uge1zYOu2z2kvqw==/6597268778262630528.jpg

G-Biosciences Spin-OUT GT-1200,與Pharmacia的Sephadex G-50的功能類似,都是用來代替比較耗時的傳統(tǒng)透析處理,以達(dá)到快速純化蛋白/替換蛋白質(zhì)緩沖液的目的,不過前者是離心式的,后者是重力式的。GT-1200適宜于純化分子量大于12,000的蛋白質(zhì),有兩種上樣量規(guī)格的:Micro和Medi。沒有現(xiàn)成的使用說明材料,聽朋友介紹這是非常不錯的品牌,在國外很火。感興趣之余啃下其英文說明書了,先了解下其使用步驟:

一、使用前準(zhǔn)備:

     1.上下顛倒數(shù)次,將管中的凝膠懸浮起來,然后100×g離心1min,讓膠體回到管底。這里有兩點需要注意的:1)新的柱子看過去幾乎是透明的,不要認(rèn)為什么填料都沒有,其實是顆粒太細(xì)了;2)離心力是×g,在離心機(jī)上顯示的是RCF這個單位,而不是RPM。這兩個單位有本質(zhì)區(qū)別,需要特別留意。其中:

     RPM(revolution per minute)為離心機(jī)每分鐘的轉(zhuǎn)數(shù)(單位:周/分鐘);RCF(relative centrifugal force)為相對離心力,以地心引力即重力加速度的倍數(shù)來表示,一般用×g表示。 兩者轉(zhuǎn)換關(guān)系如下: RCF=0.0011×r×RPM^2 RPM=(909×RCF÷r)^0.5 r為離心機(jī)轉(zhuǎn)子半徑(單位:米)。

      2.拔掉兩頭的塞子,將柱子放在10ml離心管中,1,000×g離心2min以移除儲存buffer。離心完成后,即可看見白色的填充料。

二、開始使用(交換buffer)

1.  用緩沖液平衡柱子:加入1-2ml緩沖液,將柱子放到10ml離心管中,靜置數(shù)分鐘讓緩沖液全部進(jìn)入柱體后,再重復(fù)加入3-5次。zui后以1,000×g離心2min,棄掉收集到的溶液,以保證buffer被全部替換了。

2.  將柱子放到新的離心管中,緩慢加入蛋白質(zhì)樣品。注意,上樣量為Medi的柱子zui多加入0.5ml樣品,上樣量為Micro的柱子zui多加入0.1ml樣品。樣品加在柱子中間的凝膠上,而不要碰到樹脂部件。加樣結(jié)束后靜置1-2min,讓凝膠充分將樣品吸收。

3.  將柱子放到一個新的離心管中,1,000×g離心4min,即可獲得純化好樣品了。

三、柱子的再生

1.  柱子可以重復(fù)利用。

2.  需要用到2×蛋白質(zhì)洗脫buffer,用量是每1ml填料使用1ml buffer。

3.  加入洗脫buffer后靜置5min。

4.  再用5倍填料體積的去離子水沖洗柱子。

5.  zui后用30% 的乙醇保存在4條件下。



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