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酶聯(lián)免疫檢測(cè)的幾種方法及其原理
閱讀：1675 發(fā)布時(shí)間：2022-7-22
?。?）酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA）：是將抗原或抗體吸附在固相載體表面。使抗原抗體反應(yīng)在固相載體表面進(jìn)行?？捎瞄g接法、雙抗體夾心法或競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)定抗原或抗體。
?。?）夾心法（sandwichassay）:將已知的特異抗體包裝在固相載體（塑料板凹孔或紙片上），加入待檢標(biāo)本，標(biāo)本中的抗原即可與載體上的抗原結(jié)合，洗去未結(jié)合的材料后加入該抗原的酶標(biāo)記抗體，洗去未結(jié)合的酶標(biāo)抗體，加底物顯色，用酶免疫檢測(cè)儀測(cè)量顏色的光密度，可定量測(cè)定抗原。
間接法（indirecrELISA）常用于檢查特異抗體。先將已知特異抗原包被固相載體，加入待檢標(biāo)本（可能含有相應(yīng)抗體），再加入酶標(biāo)抗Ig的抗全（即第二抗體），經(jīng)加底物顯色后，根據(jù)顏色的光密度計(jì)算出標(biāo)本中抗體的含量。
（3）BAS-ELISA：近年來(lái)對(duì)酶免設(shè)分析法的改進(jìn)是使用生物素-親合素-過(guò)氧化物酶復(fù)合物作為指示劑，組成一新的生物放大系統(tǒng)進(jìn)一步提高檢測(cè)的敏感度?？捎脕?lái)檢測(cè)多種抗原抗體系統(tǒng)如細(xì)菌、病毒、腫瘤細(xì)胞表面抗原等。一個(gè)親合素（avidin）分子可以結(jié)合4個(gè)生物素分子（biotin）。結(jié)合非常穩(wěn)定。親合素和生物素都可與抗全、酶、熒光素等分子結(jié)合，而不影響后者的生物活性。一個(gè)抗體分子可偶聯(lián)90個(gè)生物素分子，通過(guò)生物素又可連接多個(gè)親合素。因此大提高檢測(cè)的敏感度。目前應(yīng)用生物-酶標(biāo)親合素系統(tǒng)（biotinavidinsystem-ELISA,BAS-ELISA），它是通過(guò)生物素標(biāo)記抗體連接免疫反應(yīng)系統(tǒng)，同時(shí)借助生物素化酶或酶標(biāo)親合素引入酶與底物反應(yīng)系統(tǒng)。