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細胞因子相關(guān)問題,千萬別忽視!

閱讀:350        發(fā)布時間:2023-10-12

細胞因子(cytokine,CK)是免疫原、絲裂原或其他刺激劑誘導多種細胞產(chǎn)生的低分子量可溶性蛋白質(zhì),具有調(diào)節(jié)固有免疫和適應(yīng)性免疫、血細胞生成、細胞生長以及損傷組織修復等多種功能。

 

abs細胞因子

 

細胞因子具有以下作用特點:

多向性和靶向性:一種細胞因子可由多種細胞產(chǎn)生,作用于不同的靶細胞。例如,IL-5既可以來源于Th2細胞,也可以來源于肥大細胞,既能活化B細胞增殖,又能促進嗜酸性粒細胞分化、成熟,

即時性:基本不儲存,隨時產(chǎn)生并發(fā)揮作用。

局部性:通常以自分泌或者旁分泌的形式作用于周圍細胞。

相互協(xié)調(diào):以網(wǎng)絡(luò)形式發(fā)揮作用,不同細胞因子間相互抑制或促進。

多重調(diào)節(jié):發(fā)揮的效應(yīng)與細胞因子濃度、靶細胞類型、其他細胞因子種類以及種屬有關(guān)。

 

常見細胞因子的作用

名稱功能
FGF堿性成纖維細胞生長因子,bFGF,F(xiàn)GF basic 或 FGF 2 屬于一個大的 FGF 蛋白家族,后者與包括增殖、生長和分化的細胞發(fā)育的許多方面有關(guān)。FGF-basic 是一種維持胚胎干細胞在培養(yǎng)中保持未分化狀態(tài)的關(guān)鍵成分。
ILIL是一類能夠雙向調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)的細胞因子家族,主要參與免疫細胞的分化和激活。IL可劃分為IL-1細胞因子家族、共γ鏈細胞因子家族、IL-10細胞因子家族、IL-12細胞因子家族等;
EGF表皮生長因子,是一種有效的促有絲分裂因子,在體內(nèi)和體外的生長、增殖和各種表皮和上皮組織 和細胞培養(yǎng)中的一些成纖維細胞中起重要作用。EGF 產(chǎn)生的失調(diào)與某些癌癥的生長和進展有關(guān)。
INF干擾素,具有抗病毒、抑制細胞增殖、調(diào)節(jié)免疫及抗腫瘤作用。

 

由于天然的細胞因子表達量低,分泌具有短時自限性,難以收集提純,一般通過蛋白重組技術(shù)獲得,即先用基因克隆或化學合成技術(shù)獲得目的基因,連接到適合的表達載體,導入到特定的宿主細胞,利用宿主細胞的遺傳系統(tǒng),表達出有功能的蛋白質(zhì)分子。目前常用的有原核、真核、昆蟲、哺乳動物四種表達系統(tǒng)。

 

表達系統(tǒng)特點
原核產(chǎn)量高、蛋白常為包涵體,無翻譯后修飾,大分子蛋白表達困難
酵母便于純化,部分翻譯后修飾有時出現(xiàn)蛋白切割問題,糖基化不能滿足要求
昆蟲表達的大多數(shù)蛋白是可溶的,適合毒性蛋白,表達激酶等定位于細胞內(nèi)的真核蛋白
哺乳動物完善的翻譯后加工,活性接近天然蛋白,技術(shù)要求高,表達量低

 

選擇細胞因子時要注意以下幾個問題:

·細胞因子作為動物免疫抗原進行檢測類抗體的研究,蛋白純度需大于80%;若用于晶體及晶體結(jié)構(gòu)研究,蛋白純度需大于95%;

·若需選擇不同種屬來源的細胞因子,則要判斷兩種種屬的細胞是否有交叉反應(yīng)活性。一般來說,不同種屬之間蛋白同源性(序列一致性)在80%以上的基本上可確定為有交叉活性。

·根據(jù)實驗目的選擇想要的產(chǎn)品時,我們還需要關(guān)注一下內(nèi)毒素的水平,特別是作為細胞添加物使用時。

 

許多老師在收到凍干粉之后由于保存或者溶解不當造成實驗結(jié)果不理想,小愛也遇到過很多老師詢問,產(chǎn)品室溫保存了兩個月還能用嗎?溶解不了怎么回事?細胞因子儲存和溶解其實都很簡單,愛必信的細胞因子說明書中給了明確標注。

 

1.收到的凍干粉如何處理?

我們收到的凍干蛋白一般不會立即使用,這種情況下可放置-20℃儲存,室溫一般儲存三周左右,具體時間可參照說明書,請老師們妥善保存收到的產(chǎn)品。

 

2.凍干蛋白一般如何溶解?

敲黑板!??!溶解前,一定要將凍干粉離心收集于離心管底部,不同的凍干蛋白需要的溶解劑不同,比如,abs04698重組人IL4使用中蒸餾水即可溶解, abs04177 IGF-I蛋白需溶解在500mM乙酸中,這是由PH和離子濃度能多種因素決定的,大家一定要仔細閱讀說明書,此外,一定要溶解到說明書推薦的濃度范圍,否則可能會造成不全溶解或活性減弱。

 

3.溶解方式

用槍頭輕輕捶打即可,對于相對較難溶解的,可以在低速搖床上靜止兩小時左右,切不可劇烈震蕩。

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4.溶解后的蛋白如何儲存呢?

重組蛋白溶液一般可在4-7°C下儲存2-7天。避免反復凍融可將溶液分裝于聚丙烯管中(不會吸附蛋白),在<-20°C下穩(wěn)定保存3個月左右,適當加入載體蛋白(BSA、HAS、FBS等)可減少管壁對重組蛋白的吸附損耗。

愛必信提供多種細胞因子,純度高、內(nèi)毒素含量低,品質(zhì)好??傻卿浟私飧嘈畔ⅰ?/span>

 

小愛本期推薦

品名貨號規(guī)格
Mouse IL17A Proteinabs04842100μg/500μg/1mg
Recombinant Human Epidermal Growth Factor/EGFabs0417610μg/50μg/500μg/1mg
Recombinant Human Interleukin-2/IL-2abs0404510μg/50μg/100μg
Recombinant Human Nogginabs0469510μg/50μg/500μg/1mg
Recombinant Human R-Spondin-1/RSPO1 (C-6His)abs0439810μg/50μg/500μg/1mg
Recombinant Mouse IL-4abs0469710μg/50μg/100μg
Recombinant Mouse IL-7abs0097510μg
Recombinant Mouse Interleukin-2/IL‐2abs0410010μg/50μg/500μg/1mg
Recombinant Mouse Interleukin-23/IL-23abs0700010μg/50μg/500μg/1mg
Recombinant Human Transforming Growth Factor β-1/TGFB1abs0420410μg/50μg/1mg

 

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