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基因編輯革命!西湖大學開發(fā)凝聚體遞送Cas9-RNP,實現(xiàn)原代細胞高效編輯

閱讀:240      發(fā)布時間:2025-4-2
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小鼠原代免疫細胞的精準基因編輯可直接操控免疫關(guān)鍵分子,實現(xiàn)功能與信號通路的快速驗證,在保留細胞生理特性的同時避免了耗時的轉(zhuǎn)基因動物構(gòu)建。然而,這一研究利器長期受困于技術(shù)瓶頸——傳統(tǒng)的慢病毒、電穿孔和脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染系統(tǒng)在遞送 Cas9/sgRNA 核糖核蛋白(Cas9-RNP)復合物時效率低下,且嚴重損傷細胞活力。西湖凝聚體與西湖大學聯(lián)合開發(fā)的 ProteanFect CRISPRMax Ultra 小鼠免疫細胞轉(zhuǎn)染試劑盒,通過創(chuàng)新的生物分子凝聚體技術(shù),遞送 sgRNA 與重組 Cas9 蛋白 RNP 進入小鼠免疫細胞并實現(xiàn)高效基因編輯,為免疫學研究提供了突破性解決方案。同時,整個過程簡單高效,且無需 sgRNA-Cas9 提前孵育,使原代免疫細胞轉(zhuǎn)染像 HEK293 細胞系一樣容易!


ProteanFect CRISPRMax Ultra 基因編輯機制

ProteanFect 遞送系統(tǒng)實現(xiàn)基因編輯的分子機制如下(圖1):

1、Cas9 蛋白、sgRNA與 ProteanFect 內(nèi)源蛋白一起組裝成為 Cas9 RNP-凝聚體復合物;

2、Cas9 RNP 通過 Proteanfect 遞送進入細胞內(nèi);

3、Cas9 RNP 復合物被 Proteanfect 釋放并進入細胞核與靶 DNA 結(jié)合;

4、精準切割靶基因,實現(xiàn)高效基因編輯。

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圖1. ProteanFectCRISPRMax Cas9RNP遞送原理

這種遞送策略極大避免了電穿孔等物理方法對細胞膜的損傷,以及病毒載體可能引起的免疫原性問題,同時實現(xiàn)了比直接遞送 RNP 蛋白更高的編輯效率。


ProteanFect CRISPRMax Ultra遞送系統(tǒng):效率與細胞活性的平衡:

無需預組裝,凝聚體作為高效生物反應器,制備過程中,一分鐘之內(nèi)即可完成快速組裝;

無需入胞后翻譯成蛋白,快速進入后直接進行基因編輯;

不依賴于持續(xù)激活,能保持穩(wěn)定的編輯效率;

高效實現(xiàn)小鼠原代T細胞、NK細胞、γδ T細胞、Treg細胞等免疫細胞的基因編輯。

實驗數(shù)據(jù):小鼠原代T細胞中的超高效基因編輯ProteanFect CRISPR Ultra 小鼠免疫細胞轉(zhuǎn)染試劑盒對小鼠原代 T 細胞進行基因編輯:采用 TracsgRNA/Cas9 RNP 轉(zhuǎn)染的方案,結(jié)果如下圖1所示?;蚪M水平檢測(圖2左)顯示小鼠 T 細胞整體 Trac 敲除率達83.5%,蛋白水平檢測(圖2右)顯示 Trac 敲除效率達93.0%。

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圖2. 使用ProteanFect CRISPRMax Ultra小鼠免疫細胞轉(zhuǎn)染試劑盒對小鼠原代T細胞進行基因編輯


突破傳統(tǒng):ProteanFect CRISPRMax Ultra與其他CRISPR方法對比

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表1. ProteanFect與傳統(tǒng)CRISPR方法對比


全·球首·創(chuàng):基于生物分子凝聚體的分子遞送技術(shù)

ProteanFect 凝聚體技術(shù):ProteanFect CRISPRMax 采用了一種創(chuàng)新的生物分子凝聚體技術(shù):ProteanFect蛋白分子能夠在體外與核酸、蛋白等自組裝成高度規(guī)律的球體結(jié)構(gòu),這種自組裝而成的ProteanFect-核酸/蛋白復合物能夠通過細胞的主動攝入高效進入細胞內(nèi),迅速釋放核酸分子,實現(xiàn)基因表達,同時天然降解其余蛋白。

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圖3. ProteanFect核酸遞送原理示意圖(以遞送核酸為例)


ProteanFect CRISPR Ultra小鼠免疫細胞轉(zhuǎn)染試劑盒——一步到位的基因編輯解決方案

使用便捷:試劑盒中包含陽性對照,您只需準備sgRNA即可開展實驗

即開即用:所有組分已優(yōu)化配比,無需繁瑣調(diào)試

高效可靠:標準化流程確保實驗結(jié)果穩(wěn)定可重復

全·程無·憂:提供詳細操作指南和一對一技術(shù)支持

ProteanFect 助您輕松實現(xiàn)小鼠免疫細胞的精準基因編輯。如需了解更多技術(shù)細節(jié)或產(chǎn)品信息,可聯(lián)系華雅思創(chuàng)生物


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