 | 重慶市華雅干細(xì)胞技術(shù)有限公司 |
會(huì)員.png)
13
15021010459
當(dāng)前位置：首頁>>技術(shù)中心>>技術(shù)文章>>一種重組人粒細(xì)胞刺激因子的生產(chǎn)方法
在線溝通：
顏先生 （經(jīng)理）
- 電話：
- 400-021-2200
- 手機(jī)：
- 15021010459
- 傳真：
- 023-63419626
- 聯(lián)系我時(shí)，
- 告知來自化工儀器網(wǎng)
- 個(gè)性化：
- www.hystemcell.cn
- 商鋪網(wǎng)址：
- http://www.muquzhou.cn/st275923/
- 公司網(wǎng)站：
- https://www.ys-bio.cn/
一種重組人粒細(xì)胞刺激因子的生產(chǎn)方法
閱讀：748發(fā)布時(shí)間：2024-11-4
重組人粒細(xì)胞刺激因子（rG-CSF）的生產(chǎn)方法主要包括基因克隆、表達(dá)、純化和活性驗(yàn)證等步驟。以下是一個(gè)典型的生產(chǎn)流程：
一、基因克隆
選擇合適的載體
使用能夠在宿主細(xì)胞中進(jìn)行高效表達(dá)的質(zhì)粒載體，例如pET系列或pGEX系列。
基因獲取
從人類基因組中獲取G-CSF基因序列，或通過合成方法獲得。
PCR擴(kuò)增
使用特異性引物對(duì)G-CSF基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增，添加限制酶位點(diǎn)以便后續(xù)克隆。
克隆入載體
將擴(kuò)增的G-CSF基因片段通過限制酶切割后，連接到選擇的載體中，形成重組質(zhì)粒。
二、轉(zhuǎn)化與表達(dá)
轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞
將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入適宜的表達(dá)宿主細(xì)胞（如大腸桿菌、酵母或哺乳動(dòng)物細(xì)胞），以便進(jìn)行蛋白表達(dá)。
誘導(dǎo)表達(dá)
根據(jù)選用的宿主，添加誘導(dǎo)劑（如IPTG）以誘導(dǎo)目標(biāo)蛋白的表達(dá)。
培養(yǎng)細(xì)胞
在合適的培養(yǎng)基和條件下培養(yǎng)細(xì)胞，以提高重組蛋白的產(chǎn)量。
三、純化
細(xì)胞裂解
通過物理或化學(xué)方法裂解細(xì)胞，釋放重組G-CSF。
初步分離
采用離心等方法去除細(xì)胞碎片，獲得細(xì)胞裂解液。
純化步驟
進(jìn)行多步純化，常用的方法包括：
親和層析：利用G-CSF與其特異性配體的結(jié)合進(jìn)行純化。
離子交換層析：根據(jù)蛋白質(zhì)的電荷特性進(jìn)一步純化。
凝膠過濾層析：根據(jù)分子大小進(jìn)行最后的純化。
四、活性驗(yàn)證
生物活性測(cè)試
通過體外細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)或其他生物學(xué)檢測(cè)方法驗(yàn)證重組G-CSF的生物活性。
質(zhì)量檢測(cè)
對(duì)純化后的rG-CSF進(jìn)行質(zhì)譜分析、SDS-PAGE等方法進(jìn)行質(zhì)量檢測(cè)，確保其純度和分子量符合標(biāo)準(zhǔn)。
五、制劑與存儲(chǔ)
制劑開發(fā)
根據(jù)需要開發(fā)適宜的藥物制劑形式，如凍干粉或液體制劑。
存儲(chǔ)條件
確定合適的存儲(chǔ)條件，以保證重組G-CSF的穩(wěn)定性和活性。
通過上述步驟，可以有效地生產(chǎn)重組人粒細(xì)胞刺激因子，滿足臨床應(yīng)用的需求。
重慶市華雅干細(xì)胞技術(shù)有限公司主營(yíng)產(chǎn)品：Lonza支原體檢測(cè)試劑盒,Stemcell胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)基,StemRD生長(zhǎng)分化因子
化工儀器網(wǎng) 設(shè)計(jì)制作，未經(jīng)允許翻錄必究.Copyright(C) http://www.muquzhou.cn, All rights reserved.
以上信息由企業(yè)自行提供，信息內(nèi)容的真實(shí)性、準(zhǔn)確性和合法性由相關(guān)企業(yè)負(fù)責(zé)，化工儀器網(wǎng)對(duì)此不承擔(dān)任何保證責(zé)任。 溫馨提示：為規(guī)避購買風(fēng)險(xiǎn)，建議您在購買產(chǎn)品前務(wù)必確認(rèn)供應(yīng)商資質(zhì)及產(chǎn)品質(zhì)量。
