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樣本準備：血清樣本采集后，需在 1000×g 的條件下離心 10 分鐘，小心分離出血清；血漿樣本同樣按此離心條件處理，注意不同抗凝劑對實驗可能產(chǎn)生的影響，需嚴格按照要求選擇抗凝劑；組織勻漿制備時，將適量組織與勻漿緩沖液按比例混合，使用勻漿器充分研磨，隨后以 1000×g 離心 10 分鐘，取上清備用；細胞培養(yǎng)上清液則直接以 1000×g 離心 10 分鐘，去除細胞碎片等雜質(zhì)。若樣本不立即使用，應分成小份，在 - 20℃或 -80℃環(huán)境下保存，防止反復凍融，使用前需在室溫下緩慢充分解凍并確保均勻。
試劑準備：從冰箱取出試劑盒后，將所有試劑在室溫下平衡 30 - 60 分鐘，使試劑溫度與室溫一致，并充分混勻。按照說明書要求，用蒸餾水將濃縮緩沖液、顯色劑等試劑準確稀釋成工作液。同時，依據(jù)實驗所需檢測的樣本數(shù)量，確定反應管或酶標板的使用量，標準品孔和空白孔建議設置復孔，以提高檢測結(jié)果的準確性與可靠性。
加樣：在反應管或酶標板上精確設置標準品孔、空白孔與待測樣本孔。向標準品孔中加入適量不同活性濃度的精/氨酸酶標準品溶液，濃度梯度需嚴格按照試劑盒說明書進行配置；待測樣本孔加入適量處理好的樣本；空白孔則加入等量的緩沖液替代樣本。加樣時，務必使用微量加樣器，并確保加樣量準確，將樣本或標準品加于反應管或酶標板孔底部，盡量避免觸及管壁或孔壁，加樣后輕輕振蕩，使液體充分混勻。
反應與顯色：向各孔中加入適量的 L - 精/氨酸底物溶液，輕輕混勻后，將反應管或酶標板置于 37℃恒溫培養(yǎng)箱中溫育一定時間（具體溫育時長參照試劑盒說明書），使精/氨酸酶與底物充分反應。溫育結(jié)束后，向各孔中依次加入適量的顯色劑，輕輕振蕩混勻，避免產(chǎn)生氣泡，在室溫下避光顯色 15 - 20 分鐘。
檢測與計算：顯色反應結(jié)束后，立即使用酶標儀在 540nm 波長處測定各孔的 OD 值。依據(jù)標準品的 OD 值繪制標準曲線，通過標準曲線計算出樣本中精/氨酸酶的活性。若樣本進行過稀釋，還需乘以相應的稀釋倍數(shù)得到實際活性。
試劑盒中的所有試劑在使用前必須充分平衡至室溫，避免因溫度差異影響檢測結(jié)果的準確性。同時，試劑使用后應及時放回冰箱冷藏保存，防止試劑變質(zhì)。
樣本采集、處理過程務必嚴格遵循規(guī)范操作，防止樣本受到污染或發(fā)生溶血、脂血等情況，以免干擾檢測結(jié)果。如血清樣本應避免溶血，紅細胞溶解可能釋放出影響精/氨酸酶活性檢測的物質(zhì)。
反應過程中的溫度、時間以及試劑添加量等條件需嚴格按照說明書執(zhí)行，任何偏差都可能導致檢測結(jié)果出現(xiàn)誤差。
加樣操作要精準、迅速，盡量縮短各孔之間的加樣時間間隔，保證實驗條件的一致性。使用加樣器時，需定期校準，確保加樣量的準確性。
顯色反應過程需嚴格控制時間和避光條件，避免光線直射，以保證顯色效果的穩(wěn)定性。加入顯色劑后應盡快進行 OD 值測定，一般建議在規(guī)定時間內(nèi)完成，防止結(jié)果出現(xiàn)偏差。
實驗過程中使用的所有耗材，如反應管、酶標板、吸頭、試管等，應確保無污染且質(zhì)量可靠，避免對實驗結(jié)果造成影響。
若對檢測結(jié)果存在疑問或出現(xiàn)異常情況，應及時檢查實驗操作過程、試劑狀態(tài)以及儀器性能等，必要時可重復實驗進行驗證。