1、Q: 支原體污染對細胞有什么危害？
A: 支原體污染后，不會使細胞死亡可以與細胞長期共存，培養(yǎng)基一般不發(fā)生渾濁，細 胞無明顯變化，外觀上給人以正常感覺，實則細胞收到多方面潛在影響，如引起細胞變形， 影響 DNA 合成，抑制細胞生長等，以致影響實驗數(shù)據(jù)的可信度。
2、Q: 支原體污染有什么特征？
A: 細胞狀態(tài)變差,生長變慢，在顯微鏡下觀察可能會有小黑點，但培養(yǎng)基一般不發(fā)生 渾濁。細胞傳代以后就出現(xiàn)細胞間黑點，細胞空泡化，很多類似凋亡、壞死的細胞，終細胞漂浮，*死亡。
3、Q: 細胞培養(yǎng)時，顯微鏡下的小黑點是什么？
A: 支原體污染后，細胞凋亡壞死，釋放出大量碎片，看起來就像小黑蟲子。
4、Q: 細胞通過何種途徑感染支原體？
A: 支原體污染的來源包括工作環(huán)境的污染、操作者本身的污染（某些支原體在人體是正常菌群如口腔中的支原體）、培養(yǎng)基的污染、被污染細胞造成的交叉污染、實驗器材的污染、制備細胞的原始組織或器官的污染等等，由于支原體大小為 0.1~0.8 um，無細 胞壁，可透過一般過濾膜（0.22-0.45 um），血清中也可能含有支原體。
5、Q: 支原體污染如何檢測？
A: 利用支原體具特殊專一性之 primers，經(jīng)由 PCR 反應(yīng)來復(fù)制支原體 DNA。所用 primers 來自支原體的 conserved 16S-23S rRNA 序列，由于此段序列依支原體種類不同而不同， 因此可依所復(fù)制之 DNA大小及其 restriction fragment 大小差異來作偵測與鑒定支原體。
6、Q: 如何清除支原體？
A: 由于市場同類產(chǎn)品都為抗生素類，對細胞本身也會產(chǎn)生一定影響，而且有反復(fù)發(fā) 作的風(fēng)險，吉銳生物推出的 MycoplasmaOUT?Treatment，活性成分為抗菌肽，經(jīng)多方測試表明對大部分細胞無毒害作用，因其*的作用原理，支原體不會對其產(chǎn)生耐藥性，并且其作用時間短，在三天內(nèi)就可殺滅支原體，并自動降解成氨基酸，不會對細胞造成二次污染。
7、Q: 為什么在培養(yǎng)細胞前要加入MycoplasmaOUT? Prevention？
A：由于支原體污染后能夠進入細胞，而MycoplasmaOUT? Prevention不能夠進入細胞內(nèi)也就不能殺滅已經(jīng)進入細胞的支原體，而這部分細胞死亡時會釋放其內(nèi)部的支原體，需要MycoplasmaOUT?Prevention來殺滅新釋放出的支原體，以防止新生細胞受到污染。
8、Q: 所謂的黑膠蟲污染？
A:培養(yǎng)細胞發(fā)現(xiàn)小黑點現(xiàn)象很嚴(yán)重，原來對“黑膠蟲"一說嗤之以鼻，認(rèn)為那不過是自欺欺人的借口，覺得怎么也不會發(fā)生在自己身上。但是真的就碰上了：細胞傳代以后就出現(xiàn)細胞間黑點，細胞空泡化，很多類似凋亡、壞死的細胞，終細胞漂浮，*死亡。
上述現(xiàn)象很像所謂的“黑膠蟲"。我感覺實際是支原體感染以后細胞生長不好造成的碎片和感染原蟲（現(xiàn)在看來是些胞外囊泡）的混合體。這種現(xiàn)象的直接原因是支原體等原蟲感染，間接表象是小黑點，被誤傳為“黑膠蟲"。
光鏡下看不到支原體，但是可以看到支原體感染的終末現(xiàn)象——細胞凋亡壞死，釋放出大量碎片，看起來就像小黑蟲子。
查找類似的帖子——很多人是更換血清后出現(xiàn)這種問題；
說空氣傳播的可能是一個培養(yǎng)箱的人都用了同一種血清，而不是可以通過培養(yǎng)箱空氣傳播；感染可能是牛源性的支原體，通過產(chǎn)道或血行感染。
所謂“細胞生長不受影響"，其實是污染的嚴(yán)重程度不高而已；
支原體污染嚴(yán)重就出現(xiàn)細胞大量空泡形成，細胞間空曠地帶出現(xiàn)大量黑點，細胞終凋亡、壞死，漂起來。有些國產(chǎn)血清寫著建議滅活，其實是掛羊頭賣狗肉，那個56度30分鐘更多的是為了殺殺支原體的。實際上還有很多殺不死的。但可以降低產(chǎn)品支原體等微生物污染風(fēng)險。用抗生素殺支原體，小黑點可以得到抑制，不過我想*就很難了，而且處理時間很長，少一個星期。
抗生素可以抑制細菌細胞壁及蛋白合成，支原體沒有細胞壁，而且對細胞生長有一定影響，所以不建議用抗生素殺支原體。
抗菌肽產(chǎn)品殺支原體，是利用物理的方式，支原體和細菌表面帶有正電荷，我們的抗菌肽表面帶有負(fù)電荷，通過電荷間的引力作用，抗菌肽和支原體特異性結(jié)合，通過細胞膜的融合作用，可以在支原體表面類似打孔的方式，使得支原體裂解死亡。
摘自小木蟲網(wǎng)，作者：小刀188
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