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更新時(shí)間:2024-08-24 10:23:07瀏覽次數(shù):2663評(píng)價(jià)
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 真菌是具有真核和細(xì)胞壁的異養(yǎng)生物,種屬很多,已報(bào)道的屬達(dá)1萬以上,種超過10萬個(gè) |
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貨號(hào) | D2300 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),石油 |
主要用途 | 真菌是具有真核和細(xì)胞壁的異養(yǎng)生物,種屬很多,已報(bào)道的屬達(dá)1萬以上,種超過10萬個(gè) |
真菌基因組DNA提取試劑盒
貨號(hào):D2300
規(guī)格:50T、100T
保存:室溫(15℃-25℃) 干燥保存,復(fù)檢期 12 個(gè)月,2℃-8℃保存時(shí)間更長 。
產(chǎn)品說明:
真菌是具有真核和細(xì)胞壁的異養(yǎng)生物。種屬很多,已報(bào)道的屬達(dá) 1 萬以上,種超過 10 萬個(gè)。真菌通常又分為三類,即酵母菌、霉菌和蕈菌(大型真菌) 。對(duì)于酵母菌和霉菌,可以用玻璃珠處理,而對(duì)于大型真菌,可直接用液氮研磨。經(jīng)過前期處理的菌液,用硅質(zhì)膜吸附,即可得到高純度的基因組。提取純化后的 DNA,可以直接用于 PCR/Real time-PCR,sequencing,Southern blot,mutant analysis,SNP 等下游應(yīng)用實(shí)驗(yàn)。
操作步驟:
使用前請(qǐng)先在漂洗液中加入無水乙醇,加入體積請(qǐng)參照瓶體上的標(biāo)簽。所有離心步驟均為使用臺(tái)式離心機(jī)在室溫下離心。
1、樣品的處理:
1)對(duì)于酵母菌,取 1-2ml 培養(yǎng)好的菌液,離心收集,棄上清。加入 200ul 溶液 A,加入 20ul RNase A,再加入 100mg 玻璃珠,在高速振蕩器上振蕩,約 5-10min。
2)霉菌(孢子也可相同處理):取 50-100mg 菌絲,加 200ul 溶液 A,用玻璃研磨器適當(dāng)研磨分散菌絲,加入 20ul RNase A,再加入 100mg 玻璃珠,在高速振蕩器上振蕩,約 30min。
3)大型真菌(如蘑菇等) :稱取 50-100mg 樣品,倒入適量的液氮,立即研磨重復(fù) 3 次,使樣品研成粉末(如無液氮, 可加 200ul 溶液 A 后用玻璃研磨器適當(dāng)研磨) , 加 200ul 溶液 A, 加入 20ul RNase A, 再加入 100mg玻璃珠,在高速振蕩器上振蕩,約 5min。
2、 加入 20ul 10mg/ml 的蛋白酶 K, 充分混勻, 55℃水浴消化, 30min。 消化期間可顛倒離心管混勻數(shù)次, 12000rpm離心 2min。將上清轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的離心管中。如有沉淀,可再次離心。
3、在上清中加入 200ul 溶液 B,充分混勻。如出現(xiàn)白色沉淀,可放 55℃水浴 5min,沉淀即會(huì)消失,不影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)。如溶液未變清亮,說明樣品消化不*,可能導(dǎo)致提取的 DNA 量少及不純,還有可能導(dǎo)致上柱后堵柱子,請(qǐng)?jiān)黾酉瘯r(shí)間。
4、再加入 200ul 無水乙醇,充分混勻,此時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀沉淀,不影響 DNA 的提取,將溶液和絮狀沉淀都加入吸附柱中,放置 2 分鐘。
5、12000rpm 離心 1min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。
6、向吸附柱中加入 700ul 漂洗液(使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無水乙醇),12000rpm 離心 1min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。
7、向吸附柱中加入 500ul 漂洗液,12000rpm 離心 1min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。
8、12000rpm 離心 2min,將吸附柱置于室溫或 50℃溫箱放置數(shù)分鐘,目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除,否則漂洗液中的乙醇會(huì)影響后續(xù)的實(shí)驗(yàn)如酶切、PCR 等。
9、將吸附柱放入一個(gè)干凈的離心管中,向吸附膜中央懸空滴加 50-200ul 經(jīng) 65℃水浴預(yù)熱的洗脫液,室溫放置5min,12000rpm 離心 1min。
10、離心所得洗脫液再加入吸附柱中,室溫放置 2min,12000rpm 離心 2min,即可得到高質(zhì)量的基因組DNA。
注意事項(xiàng):
1. 由于真菌種類萬千,對(duì)于一些特別難處理的真菌,可用液氮研磨,再用玻璃珠振蕩,蛋白酶K處理,一般都可以得到一定量的基因組DNA,如電泳檢測很弱,一般PCR都會(huì)有較好結(jié)果。
2. 若溶液A或溶液B中有沉淀,可在 55℃水浴中重新溶解。
3. 如果DNA提取量很少,可加長玻璃珠處理時(shí)間,如果提取DNA成彌散短條帶,可減少玻璃珠處理時(shí)間。
4. 洗脫緩沖液的體積好不少于 50ul,體積過小會(huì)影響回收效率;洗脫液的pH值對(duì)洗脫效率也有影響,若需要用水做洗脫液應(yīng)保證其pH值在 8.0 左右(可用NaOH將水的pH值調(diào)此范圍),pH值低于 7.0 會(huì)降低洗脫效率;DNA產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃,以防DNA降解。
5. DNA濃度及純度檢測:得到的基因組DNA片段的大小與樣品保存時(shí)間、操作過程中的剪切力等因素有關(guān)?;厥盏玫降腄NA片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)檢測濃度與純度。DNA應(yīng)在OD 260 處有顯著吸收峰,OD 260 值為 1 相當(dāng)于大約 50 μg/ml雙鏈DNA、40 μg/ml單鏈DNA。OD 260/ OD 280 比值應(yīng)為 1.7-1.9,如果洗脫時(shí)不使用洗脫緩沖液,而使用去離子水,比值會(huì)偏低,因?yàn)閜H值和離子存在會(huì)影響光吸收值,但并不表示純度低。
6. 在確保樣品無誤的情況下,如經(jīng)過多次試驗(yàn),都無法提出DNA,請(qǐng)將部分樣品寄我公司,我們代為摸索優(yōu)化條件,以使您的實(shí)驗(yàn)?zāi)軌蛘_M(jìn)行下去。
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真菌基因組DNA提取試劑盒訂購說明:
1、絕大部分產(chǎn)品備有現(xiàn)貨,一般情況下都能訂貨當(dāng)日發(fā)貨。
2、部分非常用產(chǎn)品,需提前1-2日預(yù)訂,海外期貨則需要提前3-6周預(yù)訂。
3、部分產(chǎn)品價(jià)格會(huì)因貨期、批次等因素發(fā)生變化,若有變動(dòng)以訂貨當(dāng)日新價(jià)格為準(zhǔn)。
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運(yùn)輸說明:
1、極低溫產(chǎn)品:極低溫產(chǎn)品運(yùn)輸過程中加裝干冰運(yùn)輸。用干冰把產(chǎn)品包裹起來,再用泡沫盒密封,膠帶層層粘住泡沫盒,放入索萊寶的箱子,然后交付給合作快遞,安全快速高效放心的送客戶的手中,保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一,為您的實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航。
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