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超低分子量蛋白maker那里有
貨號 ： PR1300
規(guī)格 ： 15T (150 µ1)
保存 ： -20℃保存，有效期為一年。
產品簡介:
本產品包含3種多肽和2種低分子量蛋白質組成， 分子量范圍為3. 3kD-20. 1kD。 可以用來判斷SDS-PAGE上多肽和小蛋白的分子量。本品為蛋白質和多肽混合物的凍干粉，每種蛋白含量約為15-22.5ug，配有一支1×上樣緩沖液。
使用說明:
1. 開封后，溶于150 µ1 1×上樣緩沖液，于95℃水浴5分鐘，可根據需要進行小量分裝，每管10 µl，-20℃貯存，每次取一管使用，避免反復凍融。
2. 使用前取分裝后的小管室溫融化后，95℃預熱5分鐘即可上樣電泳， 用考馬斯亮藍G-250染色后可見5條蛋白帶(見下示意圖) 。
凝膠的配置方法:
| 分離膠 | 分離膠 | 分離膠 | 分離膠 | 夾層膠 | 濃縮膠 |
| 20%/4.5ml | 16.5%/4.5ml | 15.5%/4.5ml | 10%/2ml | 4%/2ml | |
| 49.5%T 3%C | / | / | / | 0.407ml | 0.160ml |
| 49.5%T 6%C | 1.82ml | 1.50ml | 1.395ml | / | / |
| 凝膠緩沖液 | 1.50ml | 1.50ml | 1.50ml | 0.667ml | 0.496ml |
| 甘油 | 0.48ml | 0.48ml | 0.48ml | / | / |
| ddH 2 O | 0.70ml | 1.02ml | 1.125ml | 0.926ml | 1.344ml |
| 10%APS | 40µl | 40µl | 40µl | 20µ| | 20µ| |
| TEMED | 5µl | 5µl | 5µl | 3µl | 3µl |
凝膠制備及染色注意事項:
1. 先配制分離膠，聚合后再配制夾層膠，后配制濃縮膠，3種膠的制膠體積比為4:1.5:1。電泳時，30v跑1-2小時后，待指示前沿到達分離膠上沿時，把電壓調100v，電泳結束，整個電泳過程大約需要6-8小時。
2. 由于多肽所含的氨基酸數目較少，因此如該多肽含有過多的極性氨基酸(堿性或酸性)，則會影響其在SDS-PAGE 圖上的條帶遷移率，即其表觀分子量可能和多肽的氨基酸理論推算分子量有一定距離。
3. 由于 SDS-PAGE 的圖譜上，蛋白質對數分子量和遷移率成正比直線關系的分子量范圍為 15,000-200,000因此對于分子量小于 10000 的蛋白質或多肽的分子量，只能根據標準分子量進行估計，推斷其是否落入預測的分子量范圍。
4. 由于超低分子量多肽（3000 及 3000 以下） ，極易從凝膠上浸出，因此染色及脫色時間不宜太長，脫色后凝膠也不宜在水中浸泡保存過久，否則條帶會消失。
5. 電泳之后可將膠置于固定液中固定20分鐘，再進行染色，能得到較好的蛋白條帶；如時間不允許，也可不進行固定直接染色。 如果使用配方7進行染色時效果不好或考慮其毒性， 請選擇本公司的考馬斯亮藍蛋白膠快速染色液(貨號:P1300)，該產品具有染色快，無毒，靈敏性高等特點，是常規(guī)染色液的替代品。
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P1300-500 考馬斯亮藍快速染色
附: 小分子蛋白質SDS-PAGE 電泳試劑配制
1. 49.5% T 3 % C (配制夾層膠和濃縮膠)
丙烯酰胺 48g
甲叉雙丙烯酰胺 1.5g
用ddH 2 0溶解后定容100ml
2. 49. 5 % T 6 % C (配制分離膠)
丙烯酰胺 46. 5g
甲叉雙丙烯酰胺 3. 0g
用ddH 2 0溶解后定容100ml
3. 凝膠緩沖液
Tris堿 182g
ddH 2 0 300ml
用HCl調節(jié)pH值8.45
用ddH 2 0定容 500ml
再加入SDS 1.5g
4 . 10×陽極緩沖液(下槽緩沖液〕
Tris堿 121. 1 g
ddH 2 0 400ml
用HCl調pH值8.9
用ddH 2 0定容 500ml
5. 陰極緩沖液(上槽緩沖液)
Tris堿 12 .11g
Tricine 17.92g
SDS 1g
用ddH 2 0定容1000ml
此溶液不用調節(jié)pH值
6. 固定液
0.5% 戊二醛
30% 乙醇
用ddH 2 0定容100ml
7. 染色液
50% 甲醇
10% 乙酸
0.2% 考馬斯亮藍G-250
用ddH 2 0定容500ml
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