高靈敏度:可敏銳檢測到極微量的人絲氨/酸蛋白酶,檢測下限達皮克級別。即便在絲氨/酸蛋白酶低表達樣本中,也能精準測定含量,助力科研人員探究其在生理和病理狀態(tài)下低水平表達時的功能。
特異性強:試劑盒內抗體經(jīng)嚴格篩選與優(yōu)化,對人絲氨/酸蛋白酶特異性ji高,與其他蛋白酶及干擾物質幾乎無交叉反應,有效杜絕假陽性結果,保障檢測結果準確可靠。
重復性佳:憑借嚴格生產(chǎn)工藝和完善質量控制體系,試劑盒批內和批間重復性表現(xiàn)優(yōu)異。多次重復檢測同一批次樣本,結果的變異系數(shù)(CV)被嚴格控制在極小范圍,實驗人員能獲取穩(wěn)定且可重復的數(shù)據(jù),有力支持科學研究的可重復性。
操作便捷:配備齊全試劑及詳盡操作說明書,實驗步驟清晰明了。新手實驗人員也能快速上手操作,整個檢測流程無需復雜儀器設備和高深專業(yè)技能,顯著節(jié)省實驗時間與人力成本。
檢測范圍寬:檢測范圍覆蓋人絲氨/酸蛋白酶在正常生理以及多種病理狀態(tài)下常見的濃度區(qū)間,既能精準檢測正常情況下低水平的絲氨/酸蛋白酶表達,也能準確測定在疾病或實驗干預后可能出現(xiàn)的高水平絲氨/酸蛋白酶變化,適用于各類相關研究場景。
樣本準備:根據(jù)實驗目的收集血清、血漿、組織勻漿、細胞培養(yǎng)上清等樣本。確保樣本采集過程規(guī)范,避免污染、溶血等情況干擾檢測結果。若樣本采集后需保存,應置于 - 20℃或 - 80℃冰箱,防止反復凍融。
試劑準備:從冰箱取出試劑盒,使其恢復至室溫。按說明書依次準備好標準品、酶標抗體、底物、洗滌液等試劑。標準品需進行系列倍比稀釋,用于繪制標準曲線。
加樣:將稀釋好的標準品和處理后的樣本加入預包被有抗人絲氨/酸蛋白酶抗體的微孔板中,同時設置空白對照孔。輕輕振蕩使液體混合均勻,隨后將微孔板放入 37℃恒溫孵育箱孵育一段時間,促使樣本中的絲氨/酸蛋白酶與包被抗體充分結合。
洗滌:孵育結束后,倒掉孔內液體,用洗滌液充分洗滌微孔板 5 次,以清除未結合的物質,降低非特異性背景信號。每次洗滌后要將微孔板拍干,確保洗滌效果。
加酶標抗體:向每孔加入適量酶標抗體,再次輕輕振蕩混勻,放入 37℃恒溫孵育箱孵育一段時間,讓酶標抗體與已結合在包被抗體上的絲氨/酸蛋白酶結合。
再次洗滌:重復洗滌步驟,去除未結合的酶標抗體。
顯色:向每孔加入底物工作液,輕輕振蕩混勻,將微孔板置于 37℃避光環(huán)境孵育,此時酶標抗體上的酶會催化底物顯色,顏色逐漸變深。
終止反應:當顯色達到預期效果,加入終止液終止反應。溶液顏色隨即固定,應立刻使用酶標儀在特定波長下測定各孔吸光度值。
結果計算:根據(jù)標準品的吸光度值繪制標準曲線,依據(jù)樣本的吸光度值從標準曲線上查出對應的絲氨/酸蛋白酶濃度,并結合樣本的稀釋倍數(shù)進行校正,最終得出樣本中絲氨/酸蛋白酶的實際濃度。