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單糖分析指南，Ludger可以提供單糖分析服務(wù)
點(diǎn)擊次數(shù)：3106 發(fā)布時(shí)間：2015-1-30
單糖分析指南如下，Ludger公司可以提供單糖分析的技術(shù)服務(wù)
單糖分析是監(jiān)管機(jī)構(gòu)在生物制藥表征的產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格指南中提出的一個(gè)要求。單糖分析可用于在藥物開發(fā)的各個(gè)階段，作為確定糖基化（N-連接和/或O-連接）類型和糖基化程度的方法。它也可以用于證明在實(shí)際生產(chǎn)過程中多批次之間大量釋放的質(zhì)量控制檢測(cè)的一致性。
較廣泛使用的單糖分析方法如下：
1. 通過輕度酸水解放糖蛋白上的單糖。
2. 釋放的單糖用2-氨基苯甲酸（2-AA）進(jìn)行熒光標(biāo)記。
3. 用HPLC或UHPLC柱對(duì)2-AA標(biāo)記的單糖進(jìn)行定量分析。
LudgerTag?單糖釋放和標(biāo)記試劑盒（貨號(hào)：LT-MONO-96）可以提供所有需要的從糖蛋白釋放中性和氨基單糖以及2-AA標(biāo)記的功能。該試劑盒包含有96個(gè)糖蛋白樣品（可用于每個(gè)大約50 μg的糖蛋白）的試劑和材料。
它包括含6個(gè)單糖單獨(dú)混合的定量標(biāo)準(zhǔn)品。該單獨(dú)混合標(biāo)準(zhǔn)品能校準(zhǔn)試驗(yàn)儀器，從而可以定量的確定糖蛋白的單糖組成。
我們建議用五點(diǎn)校準(zhǔn)曲線為此標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行校準(zhǔn)，這在試劑盒說明書中有詳細(xì)說明。
木糖是一種通常存在于植物和昆蟲的單糖，但不是哺乳動(dòng)物或酵母表達(dá)載體的單糖。此試劑盒也包含了木糖。它可以被用來作為內(nèi)參使用（即在標(biāo)記之前加入到每個(gè)樣品）。這樣能補(bǔ)償樣品在處理過程中發(fā)生的任何移液或樣品制備誤差的損失。我們還建議純化糖肽標(biāo)準(zhǔn)品，是LudgerBioQuant?*量化的標(biāo)準(zhǔn)品，作為陽性對(duì)照。
這個(gè)定量標(biāo)準(zhǔn)品（貨號(hào)：BQ-GPEP-A2G2S2-10U）是一個(gè)復(fù)雜的N-連接雙觸角聚糖，終止于兩個(gè)N-乙酰氨基酸。使用此標(biāo)準(zhǔn)品將可以檢查聚糖的釋放、標(biāo)記和回收的有效性，并可以增加您的單糖測(cè)定準(zhǔn)確性。
根據(jù)您實(shí)驗(yàn)室的需求，我們提供兩種色譜柱對(duì)標(biāo)記的單糖進(jìn)行分析。如果使用液相色譜法（HPLC），我們建議使用LudgerSep?R2柱（貨號(hào): LS-R2-4.6×150），它能有效的分離在大部分N-連接和O-連接聚糖中存在的七個(gè)主要單糖。如果使用超液相色譜（UHPLC），我們建議使用LudgerSep?UR2柱（貨號(hào): LS-UR2-2.1x50），它可在8分鐘內(nèi)分離每個(gè)樣本。參見圖1：
圖1：用LudgerSep UR2 UHPLC色譜柱（貨號(hào): LS-UR2-2.1x50）分離的2-AA標(biāo)記單糖標(biāo)準(zhǔn)品。以下單糖都在8分鐘內(nèi)出峰：氨基葡萄糖（GlcN），氨基半乳糖（GalN），半乳糖（Gal），甘露糖（Man），葡萄糖（Glc），木糖（Xyl）和巖藻糖（Fuc）
單糖分析相關(guān)產(chǎn)品
商品型號(hào) | 英文品名 | 中文品名 | 包裝 |
LT-MONO-96 | Monosaccharide Release & Labeling Kit | 單糖釋放和標(biāo)記試劑盒 | 2 Reaction Sets |
LS-R2-4.6x150 | LudgerSep R2HPLC Column | R2 HPLC 色譜柱 | 4.6 x 150 mm |
LS-UR2-2.1x50 | LudgerSep uR2UHPLC Column-monosaccharide | uR2 UHPLC 色譜柱-單糖 | 2.1x 50 mm |
LS-R-BPTX10 | LudgerSepR BPT Solvent | 10倍BPT溶液 | 50ml |
CM-MONOMIX-10 | Mix of six monosaccharide quantitative standards (glucosamine, galactosamine, galactose, mannose, glucose/dextroseand fucose ) | 6個(gè)單糖混標(biāo)準(zhǔn)品 (葡萄糖胺, 半乳糖胺, 半乳糖, 甘露糖,葡萄糖和巖藻糖 ) | 10 nmol |
BQ-GPEP-A2G2S2 | A2G2S2 glycopeptide standard | A2G2S2 糖肽標(biāo)準(zhǔn)品（用于單糖釋放和標(biāo)記過程） | 10 μg |