MCF-7-DDP細(xì)胞

一、       基本特性

細(xì)胞名稱：MCF-7-DDP

描述：采用順鉑逐漸增加劑量和間歇大劑量沖擊相結(jié)合的方法誘導(dǎo)MCF-7細(xì)胞對(duì)順鉑的耐藥性，細(xì)胞對(duì)順鉑的zui大耐受性達(dá)5 μg/mL。

細(xì)胞形態(tài)：上皮樣

組織來(lái)源：胸水

細(xì)胞活力：95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）

細(xì)胞檢測(cè)：細(xì)胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌

培養(yǎng)條件：RPMI-1640(Gibco,31800-022)，90%；胎牛血清，10%。 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%； 溫度：37℃。

二、       使用方法

客戶收到細(xì)胞后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。

1.    收到細(xì)胞，請(qǐng)查看瓶子是否有破裂，培養(yǎng)基是否漏出，是否渾濁，如有請(qǐng)盡快和我們。

2.    如包裝完好，取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精消毒,拆下封口膜,在顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)是否正常，細(xì)胞的貼壁情況以及細(xì)胞密度,然后放入37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時(shí)或者，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

3.    細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定后，棄除培養(yǎng)瓶中大部分液體，只剩5-10ml左右培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)就可以了，超過(guò)80%匯合度時(shí)，請(qǐng)按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。

如為懸浮細(xì)胞，吸出培養(yǎng)液，1000轉(zhuǎn)/分鐘離心3-5min,吸出上清，管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。

4.    細(xì)胞傳代

1)    吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS 2-3ml清洗細(xì)胞一次；

2)    添加0.25%胰蛋白酶消化液約1.5ml至培養(yǎng)瓶中，37℃溫浴1-2min左右；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入*培養(yǎng)液終止消化；

3)    用吸管輕輕吹打混勻，按1:2或1:3等適當(dāng)?shù)谋壤M(jìn)行接種傳代，然后補(bǔ)充新鮮的*培養(yǎng)基至5ml，放入37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4)    待細(xì)胞*貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基。

三、       注意事項(xiàng)

1.    在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，請(qǐng)注意保持無(wú)菌操作；

2.    傳代培養(yǎng)過(guò)程中，胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長(zhǎng)狀態(tài)；

3.    該細(xì)胞只可用于科研。