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上海信裕生物科技有限公司
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Stbl2 Chemically Competent Cell

參   考   價(jià): 1350

訂  貨  量: ≥1  臺(tái)

具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)

產(chǎn)品型號(hào)

品       牌其他品牌

廠商性質(zhì)生產(chǎn)商

所  在  地上海

更新時(shí)間:2020-09-01 18:18:21瀏覽次數(shù):749次

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純度 99.99% 供貨周期 現(xiàn)貨
規(guī)格 100μl/支 貨號(hào) XY9017
應(yīng)用領(lǐng)域 醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁 主要用途 Stbl2菌株來(lái)源于 JM109 E. coli strain,適合克隆不穩(wěn)定插
Stbl2 Chemically Competent Cell來(lái)源于 JM109 E. coli strain,適合克隆不穩(wěn)定插入片段 (正向重復(fù)序列,逆轉(zhuǎn)錄病毒序列等); mcrA突變和mcrBC-hsd RMS-mrr deletion 使該菌株更適于克隆甲基化的基因組序列;同時(shí)Stbl2也可用于慢病毒載體的構(gòu)建。recA1和endA1的突變有利于克隆DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取。

Stbl2 Chemically Competent Cell

產(chǎn)品規(guī)格

Stbl2:                                                       100μl/支

pUC19 (control vector,10pg/μl):                   10μl

保存條件(保質(zhì)期):                            -80℃(6個(gè)月) 

基因型

F- mcrAΔ(mcrBC-hsdRMS-mrr)recA1 endA1 lon gyrA96 thi supE44 relA1λ-Δ(lac-proAB) 

 

Stbl2 Chemically Competent Cell產(chǎn)品說(shuō)明

Stbl2菌株來(lái)源于 JM109 E. coli strain,適合克隆不穩(wěn)定插入片段 (正向重復(fù)序列,逆轉(zhuǎn)錄病毒序列等); mcrA突變和mcrBC-hsd RMS-mrr deletion 使該菌株更適于克隆甲基化的基因組序列;同時(shí)Stbl2也可用于慢病毒載體的構(gòu)建。recA1和endA1的突變有利于克隆DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取。不存在lacIqZΔM15,不可用于藍(lán)、白斑篩選。Stbl2感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作,pUC19檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率可達(dá)109 cfu/μg DNA。

 

操作方法

1. Stbl2感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA (質(zhì)?;蜻B接產(chǎn)物) 并用手打EP管底輕輕混勻 (避免用槍吸打),冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

3. 向離心管中加入0.9 mL室溫S.O.C.或LB培養(yǎng)基(S.O.C.營(yíng)養(yǎng)豐富,可提高轉(zhuǎn)化效率)。

4. 37℃,225 rpm復(fù)蘇60分鐘或30℃,225 rpm復(fù)蘇90分鐘。

(當(dāng)質(zhì)粒中含有不穩(wěn)定片段時(shí),30℃培養(yǎng)可降低錯(cuò)誤重組的概率,若轉(zhuǎn)化control pUC19計(jì)算轉(zhuǎn)化效率,則需37℃,225 rpm復(fù)蘇60分鐘)

5. 5000rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的S.O.C.或LB培養(yǎng)基上。

6. 將平板倒置放于37℃或30℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。

(當(dāng)質(zhì)粒中含有不穩(wěn)定片段時(shí),30℃培養(yǎng)可降低錯(cuò)誤重組的概率,若轉(zhuǎn)化control pUC19計(jì)算轉(zhuǎn)化效率,則需37℃培養(yǎng)過(guò)夜)

 

注意事項(xiàng)

1. 感受態(tài)細(xì)胞在冰中緩慢融化,插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA,不可在冰中放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng),長(zhǎng)時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

2. 混入質(zhì)?;蜻B接產(chǎn)物時(shí)應(yīng)輕柔操作。

3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒或高效率的連接產(chǎn)物可相應(yīng)減少終用于涂板的菌量。

4. S.O.C.或LB培養(yǎng)基均可使用,S.O.C.可提高轉(zhuǎn)化效率20%;實(shí)驗(yàn)人員可選擇在37℃或30℃培養(yǎng)細(xì)胞,37℃條件下,菌生長(zhǎng)速度加快,有利于提高質(zhì)粒產(chǎn)量,30℃培養(yǎng)可降低錯(cuò)誤重組概率。

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