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上海信裕生物科技有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第12年

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當(dāng)前位置:上海信裕生物科技有限公司>>細(xì)胞系>>大鼠細(xì)胞系>> NRK-52E-GFP(大鼠腎細(xì)胞(GFP標(biāo)記))

NRK-52E-GFP(大鼠腎細(xì)胞(GFP標(biāo)記))

參   考   價(jià): 3800

訂  貨  量: ≥1 瓶

具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)

產(chǎn)品型號(hào)

品       牌其他品牌

廠商性質(zhì)生產(chǎn)商

所  在  地上海

更新時(shí)間:2025-03-27 17:16:08瀏覽次數(shù):1304次

聯(lián)系我時(shí),請(qǐng)告知來自 化工儀器網(wǎng)
純度 99.9 供貨周期 一周
規(guī)格 1*10^6cells/T25方瓶 貨號(hào) XY-R009G
應(yīng)用領(lǐng)域 醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁 主要用途 僅用于科研
NRK-52E-GFP(大鼠腎細(xì)胞(GFP標(biāo)記))是生物學(xué)和醫(yī)學(xué)研究中常用的工具,指從生物體組織或器官中分離出的細(xì)胞,在體外培養(yǎng)條件下能夠存活、增殖并保持特定功能的細(xì)胞群體。

NRK-52E-GFP(大鼠腎細(xì)胞(GFP標(biāo)記))

一、細(xì)胞基本屬性

細(xì)胞名稱

NRK-52E-GFP大鼠腎細(xì)胞(GFP標(biāo)記)

細(xì)胞別稱

NRK-52E-GFP

商品貨號(hào)

XY-R009G

種屬來源

大鼠

組織來源

生長特性

貼壁生長

細(xì)胞形態(tài)

上皮細(xì)胞樣

細(xì)胞規(guī)格

1×10^6cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝

支原體檢測

培養(yǎng)基

90% DMEM+10% FBS+雙抗

培養(yǎng)條件

氣相:95%空氣+5%二氧化碳;溫度:37℃

凍存條件

無血清凍存液,液氮儲(chǔ)存

倍增時(shí)間

~24-30小時(shí)

 

細(xì)胞篩選:

該細(xì)胞為已經(jīng)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染GFP的細(xì)胞,隨細(xì)胞傳代次數(shù)的增加,其GFP熒光強(qiáng)度會(huì)逐漸減弱。若實(shí)驗(yàn)要求需要維持熒光強(qiáng)度,可以加入嘌呤霉素進(jìn)行再次篩選。

細(xì)胞經(jīng)過20μg/ml嘌呤霉素篩選,平時(shí)培養(yǎng)可維持10μg/ml嘌呤霉素

二、細(xì)胞接收后的處理

1) 收到細(xì)胞后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于室溫放置約1h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。

2) 請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

3) 貼壁細(xì)胞:細(xì)胞在室溫中放置1h,顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長和貼壁情況,有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下,可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基(若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收,重懸打入到原培養(yǎng)瓶中),加入新配制的培養(yǎng)基6-8mL,放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上,可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中,若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。

4) 細(xì)胞運(yùn)輸途中脫落操作方法:把脫落的細(xì)胞收集離心后棄上清,用PBS清洗一遍,離心棄上清,在離心管中加入1ml胰酶吹散消化20秒左右,加培養(yǎng)基終止消化后離心重新鋪平,剩下的貼壁細(xì)胞就按照正常貼壁細(xì)胞傳代方法操作。

5) 備注:運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。  收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1:2傳代 。

三、細(xì)胞培養(yǎng)操作

1) 復(fù)蘇細(xì)胞:以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考,具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主

將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min,棄去上清液,加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6 cm皿中,加入約4 mL培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第三天換液并檢查細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

a) 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。          

b) 加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.02%EDTA)于培養(yǎng)瓶中,使消化液浸潤所有細(xì)胞,將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 -3min(視細(xì)胞消化情況而定),然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml培養(yǎng)基終止消化。

c) 輕輕打勻后裝入無菌離心管中,1000 rpm離心5 min,棄去上清液,補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。          

d) 將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

貼壁細(xì)胞傳代注意點(diǎn):

l 一定要PBS洗一遍。

l 細(xì)胞多觀察幾次掌握時(shí)間,不要在細(xì)胞沒有基本脫落就終止消化然后吹打下來,這樣細(xì)胞  更容易分化和死亡。

l 不要一直對(duì)細(xì)胞吹打

3) 細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例;

a) 收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液,裝入無菌離心管中,1000 rpm條件下離心4 min,棄去上清液,用PBS清洗一遍,棄盡PBS,進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

b) 根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液,使細(xì)胞密度1×10^6~1×10^7/mL,輕輕混勻,每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液,注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。

c) 將凍存管放入-80℃冰箱,24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

四、培養(yǎng)注意事項(xiàng)

1) 細(xì)胞出現(xiàn)問題,予以重發(fā)情況

a) 細(xì)胞運(yùn)輸途中遭遇的各種問題,細(xì)胞丟失、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等,重發(fā);

b) 細(xì)胞污染問題,請(qǐng)?jiān)谑盏疆a(chǎn)品3 天內(nèi),給我們提出真實(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,核實(shí)后重發(fā);

c) 常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置2小時(shí)后,干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇后2 天后,絕大多數(shù)細(xì)胞未存活,(需提供真實(shí)清晰的細(xì)胞狀態(tài)照片),重發(fā);

d) 干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇后2天后或常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置2 小時(shí)候并且未開封,出現(xiàn)污染,重發(fā);

e) 細(xì)胞活性問題,請(qǐng)?jiān)谑盏疆a(chǎn)品7天內(nèi)給我們提出真實(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,用臺(tái)盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力,和每天的細(xì)胞照片,核實(shí)后予重發(fā);

f) 細(xì)胞收到當(dāng)天以及第2,3 天請(qǐng)拍照,3 天未告知的,視為產(chǎn)品合格。4-7 天內(nèi)出現(xiàn)問題需提供收到細(xì)胞前3天照片和細(xì)胞出現(xiàn)問題的照片以及細(xì)胞相關(guān)操作的詳細(xì)步驟,并跟技術(shù)人員溝通的,由技術(shù)人員判定為我方責(zé)任的,重發(fā)。 

2) 細(xì)胞出現(xiàn)問題,不予以重發(fā)的情況

a) 客戶操作造成細(xì)胞污染,不重發(fā);

b) 客戶嚴(yán)重操作失誤致細(xì)胞狀態(tài)不好,不重發(fā);

c) 非我們推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好,不重發(fā);

d) 細(xì)胞狀態(tài)不好,未提供真實(shí)清晰的培養(yǎng)前3 天的細(xì)胞狀態(tài)照片,不重發(fā);

e) 細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)經(jīng)其它處理導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題的,不重發(fā);

f) 收到細(xì)胞并發(fā)現(xiàn)問題與客服人員溝通的時(shí)間證明大于7 天的,不重發(fā);

g) 視具體情況而定

五、注意事項(xiàng)

1. 所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作,并請(qǐng)注意防護(hù),所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2. 建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時(shí)始終使用防護(hù)手套、衣服和戴上防護(hù)面罩。注意:凍存管浸沒在液氮中會(huì)泄漏,并會(huì)慢慢充滿液氮。解凍時(shí),液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險(xiǎn)力吹掉其蓋子,從而產(chǎn)生飛揚(yáng)的碎屑造成人員傷害。

3. 該細(xì)胞僅供科研使用!說明書僅供參考以實(shí)際到貨說明書為準(zhǔn)!                  

僅用于科研,不能用于臨床診斷!所有產(chǎn)品僅供科研使用,不得用于人或動(dòng)物的治療等任何其他用途,不為任何個(gè)人提供產(chǎn)品和服務(wù)。以實(shí)際收貨產(chǎn)品說明書為準(zhǔn),網(wǎng)站說明書僅供參考。

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