LLC-OVA-LUC (過表達OVA的小鼠肺癌細胞 熒光素酶標記)

二、細胞接收后的處理

1) 收到細胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于室溫放置約1h，若發(fā)現培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。

2) 請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據。

3) 半貼細胞和貼壁不牢（懸?。┘毎篢25瓶置于室溫放置約1h，顯微鏡下觀察細胞的情況，若細胞密度在60%以下，客戶需收集T25瓶中的懸浮細胞離心后用培養(yǎng)基重懸后打回到原培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，若細胞生長80%-90%對細胞進行傳代，傳代時需要收集培養(yǎng)基中懸浮的細胞離心后回收。

4) 備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。  收到細胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。

三、細胞培養(yǎng)操作

1) 復蘇細胞：以下細胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產品說明書為主

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含8mL培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心5min，棄去上清液，培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

2) 細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

【該細胞為懸浮和輕微的貼壁細胞，傳代可以參考以下方法：】

a) 收集：將培養(yǎng)瓶中的懸浮的細胞收集到離心管中。用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。由于細胞貼壁不牢PBS潤洗后細胞會脫落所以PBS也要回收到離心管中。

b) 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入5-6ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。

c) 將收集到的懸浮細胞、pbs清洗液中的細胞和消化下來的貼壁細胞以1000rpml離心5min，棄去上清，補加1-2mL培養(yǎng)液后重懸混勻后將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。

3) 細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例；

a) 收集細胞及細胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細胞計數。

b) 根據細胞數量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度1×10^6~1×10^7/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。

c) 將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

四、培養(yǎng)注意事項

1) 細胞出現問題，予以重發(fā)情況

a) 細胞運輸途中遭遇的各種問題，細胞丟失、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴重漏液等，重發(fā)；

b) 細胞污染問題，請在收到產品3 天內，給我們提出真實的實驗結果，核實后重發(fā)；

c) 常溫發(fā)貨的細胞靜置2小時后，干冰凍存發(fā)貨的細胞復蘇后2 天后，絕大多數細胞未存活，（需提供真實清晰的細胞狀態(tài)照片），重發(fā)；

d) 干冰凍存發(fā)貨的細胞復蘇后2天后或常溫發(fā)貨的細胞靜置2 小時候并且未開封，出現污染，重發(fā)；

e) 細胞活性問題，請在收到產品7天內給我們提出真實的實驗結果，用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，和每天的細胞照片，核實后予重發(fā)；

f) 細胞收到當天以及第2,3 天請拍照，3 天未告知的，視為產品合格。4-7 天內出現問題需提供收到細胞前3天照片和細胞出現問題的照片以及細胞相關操作的詳細步驟，并跟技術人員溝通的，由技術人員判定為我方責任的，重發(fā)。

2) 細胞出現問題，不予以重發(fā)的情況

a) 客戶操作造成細胞污染，不重發(fā)；

b) 客戶嚴重操作失誤致細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；

c) 非我們推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；

d) 細胞狀態(tài)不好，未提供真實清晰的培養(yǎng)前3 天的細胞狀態(tài)照片，不重發(fā)；

e) 細胞培養(yǎng)時經其它處理導致細胞出現問題的，不重發(fā)；

f) 收到細胞并發(fā)現問題與客服人員溝通的時間證明大于7 天的，不重發(fā)；

g) 視具體情況而定

五、注意事項

1. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2. 建議在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮。解凍時，液氮轉化成氣相可能導致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子，從而產生飛揚的碎屑造成人員傷害。

3. 該細胞僅供科研使用！說明書僅供參考以實際到貨說明書為準！

僅用于科研，不能用于臨床診斷！所有產品僅供科研使用，不得用于人或動物的治療等任何其他用途，不為任何個人提供產品和服務。以實際收貨產品說明書為準，網站說明書僅供參考。