遠志探針法PCR鑒定試劑盒（不含內(nèi)參）

Radix polygalae(Polygala tenuifolia)Probe qPCR Kit (without internal control)

遠志探針法PCR鑒定試劑盒（不含內(nèi)參）產(chǎn)品及特點：
該試劑盒基于聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）技術(shù)，利用遠志特異性的引物和熒光探針，對樣本中的遠志 DNA 進行特異性擴增和檢測。引物能夠與遠志基因組 DNA 上的特定區(qū)域結(jié)合，在 Taq DNA 聚合酶的作用下，以樣本 DNA 為模板合成新的 DNA 鏈。同時，熒光探針與目標(biāo) DNA 序列雜交，在 PCR 擴增過程中，熒光探針被 Taq DNA 聚合酶的 5' - 3' 外切酶活性切割，釋放出熒光信號，通過熒光定量 PCR 儀對熒光信號進行監(jiān)測，從而實現(xiàn)對遠志 DNA 的定性或定量分析。它具有下列特點：

1. 即開即用，用戶只需要提供樣品 DNA 模板。

2. 引物和探針經(jīng)過優(yōu)化，分析靈敏性高，可以達到 100 拷貝/反應(yīng)。

3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. 特異性高，引物是根據(jù)遠志DNA 高度保守區(qū)設(shè)計，不會跟其他的 DNA 發(fā)生交叉反應(yīng)。

5. 既可用于定性檢測，又可用于定量檢測。用于定量時其線性范圍不少于 5 個數(shù)量級。

6. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的探針法熒光定量 PCR 反應(yīng)。

7. 本產(chǎn)品只能用于科研。

規(guī)格及成分：

運輸及保存：低溫運輸，-20℃保存，保存期限為 12 個月。
自備試劑 樣品 DNA。

遠志探針法PCR鑒定試劑盒（不含內(nèi)參）使用方法：
一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（以 10E1-10E6 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供無傳染性的 DNA 片段作為陽性對照。

1. 標(biāo)記 6 個離心管，分別為 6，5，4，3，2，1。

2. 用帶芯槍頭分別加入 45μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液，最好用帶芯槍頭，下同）。

3. 在 6 號管中加入 5μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

4. 換槍頭，在 5 號管中加入 5μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

5. 換槍頭，在 4 號管中加入 5μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E4 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

二、樣品 DNA 的制備

7. 如果有 N 個樣品，最好設(shè)置 N+2 個提取，多出的一個是 PC（樣品制備陽性對照），一個是 NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?10μL 上步所得 4 號稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的起始體積一樣，以此作為

PC。另外用水作為 NC。

8. 用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)樣品 DNA 提取試劑盒兼容。也可以選購本公司的免提取核酸釋放劑。

三、Probe qPCR 反應(yīng)（20μL 體系，在樣品制備室進行）

9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+9 個 PCR 管，其中 N+2 個

用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），6個用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+4 個 PCR管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），1 個用于 PCR 陽性對照（直接用第 6 步第 4 號管的陽性對照稀釋液做模板）。下面只以定量分析為例描述操作步驟。

10. 在標(biāo)記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后最后加）：

11. 蓋上蓋子后上機，按下面參數(shù)進行 PCR：

四、數(shù)據(jù)處理

12. 如果把本試劑盒用于定量檢測，則以陽性對照濃度的 log 值為橫軸，以 Ct 值為縱軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測樣品的 Ct 值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品 DNA濃度的 log 值，再推算出其濃度。

13. 如果把本試劑盒用于定性檢測，只判斷陽性或陰性，則陰性對照 Ct 必須沒有數(shù)值，或者 Ct 值等于或者大于 40。陽性對照必須有熒光對數(shù)增長，有典型擴增曲線，Ct 值應(yīng)該小于 40。對待測樣品，如果其 Ct 小于 40 則為陽性。如果沒有 Ct 值，或大于或等于 40 則為陰性。
僅用于科研，不能用于臨床診斷！所有產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于人或動物的治療等任何其他用途，不為任何個人提供產(chǎn)品和服務(wù)。以實際收貨產(chǎn)品說明書為準(zhǔn)，網(wǎng)站說明書僅供參考。