ScreenFect™ A plus
ScreenFect ™A plus（也稱作ScreenFect ™A+）是通過點擊化學(xué)（Click Chemistry）篩選※1出的新型陽離子脂質(zhì)體組成的轉(zhuǎn)染試劑，適用于各種真核生物來源的細(xì)胞，也可直接添加至含有抗生素或者血清的培養(yǎng)基中。

ScreenFect A+

DNA & siRNA 轉(zhuǎn)染試劑

通過點擊化學(xué)開發(fā)的新型脂質(zhì)體！！

ScreenFect ™A plus（也稱作ScreenFect ™A+）是通過點擊化學(xué)（Click Chemistry）篩選^※1出的新型陽離子脂質(zhì)體組成的轉(zhuǎn)染試劑，適用于各種真核生物來源的細(xì)胞，也可直接添加至含有抗生素或者血清的培養(yǎng)基中。

使用 ScreenFect ™A plus轉(zhuǎn)染試劑可將DNA和siRNA導(dǎo)入通用實驗細(xì)胞系（HeLa、HepG2、MDCK等）、干細(xì)胞（小鼠ES細(xì)胞等）、血細(xì)胞（巨噬細(xì)胞、THP-1、RAW264.7等）、小膠質(zhì)細(xì)胞、原代細(xì)胞（原代培養(yǎng)）和昆蟲細(xì)胞中。其細(xì)胞毒性低，因此轉(zhuǎn)染后無需更換培養(yǎng)基。另外，試劑成分中不含有任何有毒有害物質(zhì)。

※1 Biomaterials. 2012 Nov; 33(32):8160-6. 2012

特點

● DNA和ScreenFect ™A plus試劑混合比例可選范圍更廣

● 使用一步法縮短分析時間至1天

● 可高效轉(zhuǎn)染難以導(dǎo)入的細(xì)胞

● 成本低

ScreenFect ™A plus 轉(zhuǎn)染性能

※ MCF-7：人乳腺癌來源細(xì)胞（上皮細(xì)胞樣形態(tài)）（貼壁系）

※ 導(dǎo)入方法：A公司新產(chǎn)品 → 2步法，ScreenFect ™A plus → 1步法

※ MDCK：狗腎小管上皮細(xì)胞來源（貼壁系）

※ 導(dǎo)入方法：A公司新產(chǎn)品 → 2步法，ScreenFect ™A plus → 1步法

※ K562：人慢性髓性細(xì)胞白血病細(xì)胞來源（懸浮系）

※ 導(dǎo)入方法：A公司新產(chǎn)品 → 2步法，ScreenFect ™A plus → 1步法

◆應(yīng)用數(shù)據(jù)

1. 向LNCaP細(xì)胞（貼壁系）中導(dǎo)入YFP融合基因的實驗

進(jìn)行向LNCaP細(xì)胞（貼壁系）中導(dǎo)入YFP融合基因的實驗，在熒光顯微鏡下比較導(dǎo)入基因的表達(dá)效率。

使用ScreenFect ™A plus和增強(qiáng)劑SFA P-reagent，可以觀察到與其他公司產(chǎn)品相同或更高的表達(dá)效率。

※ 數(shù)據(jù)刊登于BioWindow No144 (2016年6月號)

LNCap (人前列腺癌) 中的性能比較

2. 向HeLa細(xì)胞（貼壁系）中導(dǎo)入EGFP_mRNA的實驗

進(jìn)行向HeLa細(xì)胞（貼壁系）中導(dǎo)入EGFP_mRNA的實驗，在熒光顯微鏡下比較EGFP的表達(dá)效率。

使用ScreenFect ™A plus和增強(qiáng)劑SFA P試劑（產(chǎn)品編號：191-18331、197-18333），可以觀察到與其他公司產(chǎn)品相同或更高的表達(dá)效率。

※ 數(shù)據(jù)刊登于BioWindow No144 (2016年6月號)

HeLa細(xì)胞中的mRNA轉(zhuǎn)染性能比較

〔接種細(xì)胞數(shù)〕0.7 x 10⁵ cells/well

〔mRNA量〕0.1 µg/assay

〔轉(zhuǎn)染試劑混合比例〕mRNA量 (µg) : ScreenFect ™ A plus 試劑(µL) = 1 : 4

〔檢測時間〕轉(zhuǎn)染后48 h

〔曝光時間〕2 s

3. 向hiPSC（201B7株）中導(dǎo)入GFP融合基因的實驗

進(jìn)行將hiPSC（201B7株) 通過反向轉(zhuǎn)染（1-STEP)導(dǎo)入GFP融合基因的實驗，在熒光顯微鏡以及流式細(xì)胞儀下比較導(dǎo)入基因的表達(dá)效率。

使用反向轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)染hiPS細(xì)胞的效果優(yōu)異，在StemSure^® hPSC培養(yǎng)基Δ和mTeSR™ 1兩個培養(yǎng)基中，ScreenFect ™A plus表現(xiàn)出與其他公司產(chǎn)品相同或更高的導(dǎo)入效率。

※ 數(shù)據(jù)刊登于BioWindow No144 (2016年6月號)

hiPSC（201B7株)中的性能比較

   

4. 向HeLa細(xì)胞（貼壁系）中導(dǎo)入PIK3CB siRNA的實驗

使用反向轉(zhuǎn)染（1-STEP）法以及正向轉(zhuǎn)染（2-STEP）法進(jìn)行向HeLa細(xì)胞中導(dǎo)入PIK3CB siRNA的實驗，通過實時定量PCR測量PIK3CB mRNA的表達(dá)水平。

在定量結(jié)果的基礎(chǔ)上與其他公司產(chǎn)品比較敲降效率，結(jié)果顯示ScreenFect ™A plus表現(xiàn)出與其他公司產(chǎn)品相同或更高的敲降效率。

※ 數(shù)據(jù)刊登于BioWindow No149 (2017年3月號)

HeLa細(xì)胞中的性能比較

   

◆使用方法、擁有使用實績的細(xì)胞

1-Step與2-Step 操作比較

ScreenFect ™A plus一步法概要

1步法 → 從轉(zhuǎn)染到本分析的時間可縮短24 h！

ScreenFect ™A plus 轉(zhuǎn)染條件

DNA轉(zhuǎn)染

注：進(jìn)行大規(guī)模轉(zhuǎn)染時，請在轉(zhuǎn)染前準(zhǔn)備多個微管，之后再進(jìn)行轉(zhuǎn)染。

例：10 cm培養(yǎng)皿轉(zhuǎn)染相當(dāng)于 → 5~6個樣品（6孔板）

▼ ScreenFect ™A plus 推薦實驗方案

產(chǎn)品隨附的說明書中提供了簡易的實驗方案，請確認(rèn)“相關(guān)資料"中的文件。

ScreenFect™A plus推薦使用1步轉(zhuǎn)染法。在試劑方面，為保證充分的轉(zhuǎn)染效率，推薦質(zhì)粒DNA與轉(zhuǎn)染試劑的混合比例為1 : 3~1 : 4。另外，如希望進(jìn)一步抑制轉(zhuǎn)染時的細(xì)胞毒性，請使用60~80%匯合度的細(xì)胞。

siRNA轉(zhuǎn)染

注：雖然ScreenFect ™A plus也可以用于siRNA轉(zhuǎn)染，但更推薦使用ScreenFect ™ siRNA 進(jìn)行siRNA轉(zhuǎn)染。

擁有ScreenFect ™A & A plus 應(yīng)用實例的細(xì)胞

更多詳細(xì)資料請聯(lián)系富士膠片和光。

富士膠片和光將實時更新ScreenFect™數(shù)據(jù)庫中的使用實例，如對上述內(nèi)容有疑問，歡迎隨時聯(lián)系進(jìn)行咨詢。

◆產(chǎn)品列表

【相關(guān)資料】

◆一步法和兩步法實驗流程的比較

一步法比兩步法節(jié)省24小時！

高性價比的高性能基因?qū)朐噭?/strong>

ScreenFect ™ 通信

基因?qū)肴?iPS 細(xì)胞實驗數(shù)據(jù)

　　介紹使用 ScreenFect ™A plus 將基因?qū)肴薸PS細(xì)胞的實驗結(jié)果和操作步驟。本文記載了作為 iPS 細(xì)胞支架使用的 Matrigel 孔板包被方法、配制含有 Y-27632 的細(xì)胞懸浮液的操作步驟以及推薦的試劑比例，供您參考。

◆導(dǎo)入人iPS細(xì)胞（201B7株）的轉(zhuǎn)染操作實例

　　在這里，我們將介紹一些使用 StemSure^® hPSC 培養(yǎng)基Δ（產(chǎn)品編號：197-17571）的操作實例。該操作步驟的完整版和使用 mTeSR1 培養(yǎng)基的操作步驟，請與富士膠片和光聯(lián)系獲取。

<轉(zhuǎn)染試劑的配制>

將 2.0 μL 的 ScreenFect ™ A plus reagent、4.0 μg 的質(zhì)粒 DNA 加入到 160 μL 的 Opti-MEM 中制成 DNA-lipid complex。

< Matrigel 包被孔板>

1.  ４°C下溶解 Matrigel hESC-Qualified Matrix 。為防止發(fā)生凝固，請避免在室溫下溶解。

2.  用 25 mL 冷卻的 D-MEM/Ham's F-12 稀釋 300μL 的 Matrigel。

3.  稀釋后的 Matrigel 溶液按照 1 mL/well 加入到 12 孔板中。

4.  在室溫下孵育１小時以上。

<細(xì)胞懸液的配制>

1.  將 StemSure^® hPSC 培養(yǎng)基Δ在 2-8℃ 下放置數(shù)小時或過夜緩慢融解。不要在 37° C下解凍，并在一周內(nèi)使用。

2.  將 bFGF（產(chǎn)品編號：064-05381,068-05384）按照終濃度 35-100ng/mL 添加到融解后的 StemSure^® hPSC 培養(yǎng)基△中，配制成完-全培養(yǎng)基（以下稱為 sshPSC 培養(yǎng)基）。

3.  使用前將 sshPSC 培養(yǎng)基恢復(fù)至室溫。不要使用溫水浴。

4.  將 Y-27632 按照終濃度 10 μmol/L 添加到 sshPSC 培養(yǎng)基中（以下稱為 ROCKi+培養(yǎng)基）。

5.  去除 hiPS 細(xì)胞培養(yǎng)孔板中的培養(yǎng)基，用 PBS（-）清洗細(xì)胞一次。

*請在細(xì)胞匯片達(dá)到80％且處于對數(shù)增殖期時進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染。

6.  除去 PBS（-），添加 Stempro Accutase。

7.  在 37°C，5％CO₂ 培養(yǎng)箱中靜置５分鐘。

8.  用 1 mL 微量移液槍添加 ROCKi+培養(yǎng)基，將細(xì)胞從培養(yǎng)板上分離并吹散成單細(xì)胞。

9.  轉(zhuǎn)移至 15 mL離心管中。

10. 室溫下 1000 rpm（約170×g）離心３分鐘。

11. 去除上清，用ROCKi+培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。

12. 計算活細(xì)胞的數(shù)量。

13. 用 ROCKi+培養(yǎng)基將細(xì)胞濃度調(diào)整至 5×10⁵ cells/mL。

<轉(zhuǎn)染>

添加 1 mL 配制好的 DNA-lipid complex 到細(xì)胞懸液中，使用移液器充分混勻，并接種在 12 孔板中。

※要點

接種 24 小時后請更換培養(yǎng)基。此時的培養(yǎng)基不需要含有 Y-27632。

◆實驗數(shù)據(jù)

　　通過反向轉(zhuǎn)染（1-STEP）將 GFP 融合基因?qū)?hiPS 細(xì)胞（201B7株），并通過熒光顯微鏡比較基因的導(dǎo)入效率。

<StemSure^® hPSC 培養(yǎng)基Δ的使用>

細(xì)胞數(shù)：5×10⁵ cells/well

質(zhì)粒 DNA 量：4 μg/assay

轉(zhuǎn)染試劑混合比例：DNA 量（μg）：ScreenFect ™ A plus reagent (μL)=1 : 0.5

容器：12 孔板

備注：用 Opti-MEM 稀釋 ScreenFect ™ A plus reagent 和 DNA。

細(xì)胞數(shù)：5 x 10⁵ cells/well

質(zhì)粒 DNA 量：1 μg/assay

轉(zhuǎn)染試劑混合比例：DNA數(shù)量（μg）：ScreenFect ™ A plus reagent (μL)=1 : 2

容器：12 孔板

備注：用 Opti-MEM 稀釋 ScreenFect ™ A plus reagent 和 DNA。

◆使用上的注意

●　建議在單細(xì)胞狀態(tài)下進(jìn)行人iPS細(xì)胞的基因?qū)搿?/span>

●　建議基因?qū)霑r的細(xì)胞數(shù)約為 5×10⁵ cells/well。

●　當(dāng)質(zhì)粒 DNA 量多時，導(dǎo)入基因的表達(dá)量高會引起細(xì)胞死亡。

【請聯(lián)系富士膠片和光獲取PDF】

◆Q＆A

Q1. 基因?qū)胄实驮趺崔k？

A1. 通過優(yōu)化DNA量和試劑用量可提高效率。另有優(yōu)化Protocol（日語版/英語版），可聯(lián)系富士膠片和光獲取。此外，使用ScreenFect™和SFA P-reagent（產(chǎn)

A1. 品編號：191-18331）也可提高基因?qū)胄省?/span>

Q2. 如何提高表達(dá)效率？

A2. 使用ScreenFect™和SFA P-reagent（產(chǎn)品編號：191-18331）可提高表達(dá)水平。

Q3. 轉(zhuǎn)染試劑對細(xì)胞毒性強(qiáng)怎么辦？

A3. 使用ScreenFect™和SFA P-reagent（產(chǎn)品編號：191-18331）可降低細(xì)胞毒性。

Q4. 從哪些條件實驗開始比較好？

A4. 可參考各ScreenFect™產(chǎn)品的快速Protocol（日語版/英語版），請聯(lián)系富士膠片和光獲取。

Q5. 轉(zhuǎn)染過程是否需要更換培養(yǎng)基？

A5. 更換培養(yǎng)基不是必須的，但在添加轉(zhuǎn)染試劑前更換新鮮的培養(yǎng)基可提高基因?qū)胄?，改善?xì)胞狀態(tài)。

Q6. 培養(yǎng)基中能否含有血清和抗生素？

A6. 根據(jù)細(xì)胞類型、DNA導(dǎo)入量等因素，可能需要更換培養(yǎng)基，以適時控制培養(yǎng)基含或不含血清/抗生素。請根據(jù)實驗用途進(jìn)行討論。

Q7. 1-Step、2-Step是什么？

A7. 1-Step是一種反向轉(zhuǎn)染方法，即轉(zhuǎn)染前通過在細(xì)胞分離狀態(tài)下添加試劑來導(dǎo)入基因。

A7. 2-Step是一種正向轉(zhuǎn)染法，即提前一天進(jìn)行細(xì)胞的預(yù)培養(yǎng)，然后在細(xì)胞上添加轉(zhuǎn)染試劑后導(dǎo)入基因。

Q8. 能否同時導(dǎo)入多個基因？

A8. 可以。請準(zhǔn)備多種耐藥性基因，推薦使用pEBMulti 和 pCAG。

Q9. ScreenFect ™A和ScreenFect ™A plus分別適用于哪種情況？

A9. 通常情況下推薦使用基因?qū)胄矢叩腟creenFect ™A plus。但如果其對細(xì)胞毒性強(qiáng)或與ScreenFect™A plus相比無性能差異時，推薦使用細(xì)胞

A1. 毒性低且價格實惠的ScreenFect ™A。

Q10. 需要轉(zhuǎn)染siRNA時，推薦使用哪種ScreenFect ™？

A10. 可使用ScreenFect ™ siRNA。視情況，ScreenFect ™A plus也能有效轉(zhuǎn)染siRNA。使用ScreenFect ™siRNA無法達(dá)到預(yù)期結(jié)果時，可考慮

A11. 兩種試劑一同使用。

Q11. 需要轉(zhuǎn)染mRNA時，推薦使用哪種ScreenFect ™？

A11. 可使用ScreenFect ™mRNA。與SFA P-reagent一同使用時，可有效轉(zhuǎn)染mRNA，提高表達(dá)水平。

A11. 此外，ScreenFect ™A plus和SFA P-reagent共同使用的最適場景因細(xì)胞而異，部分情況下兩者共同使用能達(dá)到優(yōu)良效果。單獨使用

A11. ScreenFect ™mRNA無法達(dá)到預(yù)期結(jié)果時，可考慮上述兩種試劑一同使用。

Q12. SFA P-reagent是什么？

A12. 將質(zhì)粒DNA或mRNA導(dǎo)入各種細(xì)胞時，SFA P-reagent和ScreenFect ™一同使用可提高細(xì)胞導(dǎo)入率和轉(zhuǎn)染分子的表達(dá)水平。此外，已確認(rèn)添加

A11. SFA P-reagent還能顯著降低轉(zhuǎn)染試劑的細(xì)胞毒性。

Q13. 有在哪些細(xì)胞中的應(yīng)用實例？

A13. 已在通用細(xì)胞系（HeLa、HepG2、MDCK、MCF-7、K562 等）、干細(xì)胞、造血細(xì)胞（巨噬細(xì)胞、THP-1、RAW264.7 等）、小膠質(zhì)細(xì)胞、

A11. 原代細(xì)胞、昆蟲培養(yǎng)細(xì)胞、魚類培養(yǎng)細(xì)胞及其他細(xì)胞中實現(xiàn)基因?qū)搿?/span>

A11. 更多詳情可查看優(yōu)化Protocol（日語版/英語版），歡迎聯(lián)系富士膠片和光獲取。

Q14. 是否可提供試用裝？

A14. 歡迎向我們聯(lián)系并填寫表格申請試用裝。

Q15. ScreenFect ™是什么試劑？

A15. ScreenFect ™是一種由新型陽離子脂質(zhì)體構(gòu)成的轉(zhuǎn)染試劑。

Q16. 冷凍存儲會對產(chǎn)品性能有影響嗎？

A16. 請勿使用冷凍后的產(chǎn)品。

Q17. 如何調(diào)整所用的質(zhì)粒DNA？

A17. 推薦使用陰離子交換柱或氯化銫密度梯度離心法純化的質(zhì)粒DNA。

Q18. 血清會影響基因?qū)雴幔?/span>

A18. 血清不會影響本產(chǎn)品的性能，但建議轉(zhuǎn)染時避免使用EDTA 和硫酸葡聚糖等陰離子抑制劑。此外，轉(zhuǎn)染時避免使用抗生素也可提高轉(zhuǎn)染效率。

◆參考文獻(xiàn)