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詳細介紹
ScreenFect A+
DNA & siRNA 轉染試劑
通過點擊化學開發(fā)的新型脂質體??！
ScreenFect ™A plus（也稱作ScreenFect ™A+）是通過點擊化學（Click Chemistry）篩選※1出的新型陽離子脂質體組成的轉染試劑，適用于各種真核生物來源的細胞，也可直接添加至含有抗生素或者血清的培養(yǎng)基中。
使用 ScreenFect ™A plus轉染試劑可將DNA和siRNA導入通用實驗細胞系（HeLa、HepG2、MDCK等）、干細胞（小鼠ES細胞等）、血細胞（巨噬細胞、THP-1、RAW264.7等）、小膠質細胞、原代細胞（原代培養(yǎng)）和昆蟲細胞中。其細胞毒性低，因此轉染后無需更換培養(yǎng)基。另外，試劑成分中不含有任何有毒有害物質。
※1 Biomaterials. 2012 Nov; 33(32):8160-6. 2012
特點
● DNA和ScreenFect ™A plus試劑混合比例可選范圍更廣
● 使用一步法縮短分析時間至1天
● 可高效轉染難以導入的細胞
● 成本低
ScreenFect ™A plus 轉染性能
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※ MCF-7：人乳腺癌來源細胞（上皮細胞樣形態(tài)）（貼壁系）
※ 導入方法：A公司新產品 → 2步法，ScreenFect ™A plus → 1步法
改善難以導入的細胞的轉染效率！ |
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※ MDCK：狗腎小管上皮細胞來源（貼壁系）
※ 導入方法：A公司新產品 → 2步法，ScreenFect ™A plus → 1步法
改善難以導入的細胞的轉染效率！ |
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※ K562：人慢性髓性細胞白血病細胞來源（懸浮系）
※ 導入方法：A公司新產品 → 2步法，ScreenFect ™A plus → 1步法
改善難以導入的細胞的轉染效率！ |
◆應用數據
1. 向LNCaP細胞（貼壁系）中導入YFP融合基因的實驗
進行向LNCaP細胞（貼壁系）中導入YFP融合基因的實驗，在熒光顯微鏡下比較導入基因的表達效率。
使用ScreenFect ™A plus和增強劑SFA P-reagent，可以觀察到與其他公司產品相同或更高的表達效率。
※ 數據刊登于BioWindow No144 (2016年6月號)
LNCap (人前列腺癌) 中的性能比較
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〔接種細胞數〕3×105 cells/well 〔質粒DNA量〕1 µg/assay 〔轉染試劑混合比例〕 pDNA量 (µg) : ScreenFect ™A plus reagent (µL) = 1 : 3 〔孔板〕24孔板 | 〔接種細胞數〕1.5×105 cells/well 〔質粒DNA量〕1 µg/assay 〔轉染試劑混合比例〕 pDNA量 (µg) : ScreenFect ™A plus reagent (µL) = 1 : 3 〔孔板〕24孔板 |
2. 向HeLa細胞（貼壁系）中導入EGFP_mRNA的實驗
進行向HeLa細胞（貼壁系）中導入EGFP_mRNA的實驗，在熒光顯微鏡下比較EGFP的表達效率。
使用ScreenFect ™A plus和增強劑SFA P試劑（產品編號：191-18331、197-18333），可以觀察到與其他公司產品相同或更高的表達效率。
※ 數據刊登于BioWindow No144 (2016年6月號)
HeLa細胞中的mRNA轉染性能比較
〔接種細胞數〕0.7 x 105 cells/well
〔mRNA量〕0.1 µg/assay
〔轉染試劑混合比例〕mRNA量 (µg) : ScreenFect ™ A plus 試劑(µL) = 1 : 4
〔檢測時間〕轉染后48 h
〔曝光時間〕2 s
3. 向hiPSC（201B7株）中導入GFP融合基因的實驗
進行將hiPSC（201B7株) 通過反向轉染（1-STEP)導入GFP融合基因的實驗，在熒光顯微鏡以及流式細胞儀下比較導入基因的表達效率。
使用反向轉染法轉染hiPS細胞的效果優(yōu)異，在StemSure® hPSC培養(yǎng)基Δ和mTeSR™ 1兩個培養(yǎng)基中，ScreenFect ™A plus表現出與其他公司產品相同或更高的導入效率。
※ 數據刊登于BioWindow No144 (2016年6月號)
hiPSC（201B7株)中的性能比較
1-step 使用StemSure® hPSC培養(yǎng)基Δ | |
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ScreenFect™A plus的轉染條件 〔細胞數〕5×105 cells/well 〔質粒DNA量〕4 µg/assay 〔轉染試劑混合比例〕 pDNA量 (µg) : ScreenFect ™A plus reagent (µL) = 1 : 0.5 〔孔板〕12孔板 〔備注〕SFA plus reagent以及pDNA使用了Opti-MEM® 進行稀釋。 | 其他公司產品的轉染條件 〔細胞數〕5×105 cells/well 〔質粒DNA量〕2 µg/assay 〔轉染試劑混合比例〕 pDNA量 (µg) : ScreenFect ™A plus reagent (µL) = 1 : 2 〔孔板〕12孔板 |
1-step 使用mTeSR™1培養(yǎng)基 | |
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ScreenFect™A plus和其他公司產品的轉染條件 〔細胞數〕5×105 cells/well 〔質粒DNA量〕1 µg/assay 〔轉染試劑混合比例〕 pDNA量 (µg) : ScreenFect ™A plus reagent (µL) = 1 : 2 〔孔板〕12孔板 〔備注〕SFA plus reagent以及pDNA使用了Opti-MEM® 進行稀釋。 | |
4. 向HeLa細胞（貼壁系）中導入PIK3CB siRNA的實驗
使用反向轉染（1-STEP）法以及正向轉染（2-STEP）法進行向HeLa細胞中導入PIK3CB siRNA的實驗，通過實時定量PCR測量PIK3CB mRNA的表達水平。
在定量結果的基礎上與其他公司產品比較敲降效率，結果顯示ScreenFect ™A plus表現出與其他公司產品相同或更高的敲降效率。
※ 數據刊登于BioWindow No149 (2017年3月號)
HeLa細胞中的性能比較
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〔接種細胞數〕1×105 cells/well 〔siRNA〕5 pmol/assay 〔轉染試劑混合比例〕ScreenFect ™A plus reagent = 0.5～1.5 µL 其他公司產品 = 1.5 μL 〔孔板〕24孔板 〔檢測時間〕48 h后進行確認 | 〔接種細胞數〕0.5×105 cells/well 〔siRNA〕5 pmol/assay 〔轉染試劑混合比例〕ScreenFect ™A plus reagent = 0.5～1.5 µL 其他公司產品 = 1.5 μL 〔孔板〕24孔板 〔檢測時間〕48 h后進行確認 |
◆使用方法、擁有使用實績的細胞
1-Step與2-Step 操作比較
產品 | ScreenFect™A plus | A公司新產品(+reagent) | A公司的新產品 |
各條件 | 1-Step | 2-Step | |
實驗方案天數 | 2 Days | 3 Days | |
DNA量 | 少 | 多 | |
是否需要調整細胞數 | 可隨時調整 | 取決于預培養(yǎng)條件 | |
是否需要胰-蛋白酶處理 | 轉染時 | 預培養(yǎng)時 | |
基于HTS細胞檢測的可操作性 | +++++ | + | |
是否需要更換培養(yǎng)基 | 取決于細胞 | ||
ScreenFect ™A plus一步法概要
1步法 → 從轉染到本分析的時間可縮短24 h！
ScreenFect ™A plus 轉染條件
DNA轉染
DNA 轉染 (/well) | |||||
孔板類型 | 表面積 | 培養(yǎng)基體積 | SF-DNA 復合物的總體積 | DNA /稀釋buffer | 轉染試劑 /稀釋buffer |
96 wells | 0.3 cm2 | 100 µL | 10 µL | 50 ng/5 μL | 0.15 or 0.2 μL/5 μL |
24 wells | 2 cm2 | 500 µL | 50 µL | 250 ng/25 μL | 0.75 or 1.0 μL/25 μL |
12 wells | 4 cm2 | 1,000 µL | 100 µL | 500 ng/50 μL | 1.5 or 2.0 μL/50 μL |
6 wells | 10 cm2 | 2,000 µL | 250 µL | 1,250 ng/125 μL | 3.75 or 5.0 μL/125 μL |
注：進行大規(guī)模轉染時，請在轉染前準備多個微管，之后再進行轉染。
例：10 cm培養(yǎng)皿轉染相當于 → 5~6個樣品（6孔板）
▼ ScreenFect ™A plus 推薦實驗方案
產品隨附的說明書中提供了簡易的實驗方案，請確認“相關資料"中的文件。
ScreenFect™A plus推薦使用1步轉染法。在試劑方面，為保證充分的轉染效率，推薦質粒DNA與轉染試劑的混合比例為1 : 3~1 : 4。另外，如希望進一步抑制轉染時的細胞毒性，請使用60~80%匯合度的細胞。
siRNA轉染
siRNA 轉染 (/well) | |||||
孔板類型 | 表面積 | 培養(yǎng)基體積 | SF-siRNA 復合物的總體積 | siRNA /稀釋buffer | 轉染試劑 /稀釋buffer |
96 wells | 0.3 cm2 | 100 µL | 10 µL | 1 pmol/5 µL | 0.1～0.3 µL/5 µL |
24 wells | 2 cm2 | 500 µL | 50 µL | 5 pmol/25 µL | 0.5～1.5 µL/25 µL |
12 wells | 4 cm2 | 1,000 µL | 100 µL | 10 pmol/50 µL | 1.0～3 µL/50 µL |
6 wells | 10 cm2 | 2,000 µL | 250 µL | 25 pmol/125 µL | 2.5～7.5 µL/125 µL |
注：雖然ScreenFect ™A plus也可以用于siRNA轉染，但更推薦使用ScreenFect ™ siRNA 進行siRNA轉染。
擁有ScreenFect ™A & A plus 應用實例的細胞
更多詳細資料請聯系富士膠片和光。
No. | 細胞名稱 | No. | 細胞名稱 | No. | 細胞名稱 | No. | 細胞名稱 |
1 | 143BTK | 22 | GP2-293 | 43 | LLC-MK2 | 64 | OLHNI-2 |
2 | 786-O | 23 | H9C2 | 44 | LO2 | 65 | Mouse overy cell |
3 | A2058 | 24 | HCT116 | 45 | LoVo | 66 | PC12 |
4 | A375 | 25 | HEK293 | 46 | MC3T3 | 67 | Plat-E |
5 | A549 | 26 | HEK293 TN | 47 | MC3T3-E1 | 68 | PLC8024 |
6 | B16 | 27 | HEK293A | 48 | MCF-10 | 69 | Primary Fibroblast |
7 | B16F10 | 28 | HEK293F | 49 | MCF-10A | 70 | RAW264.7 |
8 | Ba/F3-CH1 | 29 | HEK293FT | 50 | MCF-7 | 71 | SH-SY5Y |
9 | BEAS-2B | 30 | HEK293T | 51 | MDCK | 72 | SK-Hep1 |
10 | BEL-7402 | 31 | HeLa | 52 | MEF | 73 | SKOV3 |
11 | BT549 | 32 | HeLa S3 | 53 | mES | 74 | T98G |
12 | C2C12 | 33 | HEp-2 | 54 | mHSC | 75 | TE-13 |
13 | Cell line from killifish 來自鳉魚的細胞系 | 34 | HepG2 | 55 | Microglia 小膠質細胞 | 76 | THP-1 |
14 | CHO-K1 | 35 | hiPSC | 56 | MLEC | 77 | U-251 MG |
15 | COS-7 | 36 | HK2 | 57 | MS-1 | 78 | U2OS |
16 | DB lymphoma DB淋巴瘤 | 37 | HKC | 58 | Myeloid dendritic cell (MDC) 骨髓樹突狀細胞 | 79 | U937 |
17 | DC 2.4 | 38 | HL7704 | 59 | NB1RGB | 80 | Vero |
18 | Du145 | 39 | HuH-7 | 60 | NCI-H1703 | 81 | Drosophira ovary somatic cell |
19 | EL4 | 40 | HUVEC | 61 | NE3 | 82 | HT1080 |
20 | Endothelium cell 內皮細胞 | 41 | Ins-1 | 62 | NIH 3T3 | 83 | RH7777 |
21 | EPC(carp) | 42 | L428 | 63 | NK92 | 84 | HaCaT |
富士膠片和光將實時更新ScreenFect™數據庫中的使用實例，如對上述內容有疑問，歡迎隨時聯系進行咨詢。
◆產品列表
| 產品編號 | 產品名稱 | 產品規(guī)格 |
| 293-73201 | ScreenFect™ A | 0.2 mL |
| 299-73203 | 1 mL | |
| 297-73204 | 1 mL×5 | |
| 293-75901 | ScreenFect™ mRNA | 0.2 mL |
| 299-75903 | 1 mL | |
| 299-75001 | ScreenFect™ siRNA | 0.2 mL |
| 295-75003 | 1 mL | |
| 290-80203 | ScreenFect™ UP-293 | 1 L用 |
| 294-80201 | 100 mL用 | |
| 191-18331 | SFA P-reagent | 100 μL |
| 197-18333 | 500 μL | |
| 194-18181 | ScreenFect™ Dilution Buffer | 50 mL |
【相關資料】
◆一步法和兩步法實驗流程的比較
產品名稱 | ScreenFect ™ A plus | Ａ廠家新產品 （+試劑） | Ａ廠家產品 |
推薦的實驗流程 | 一步法 | 兩步法 | |
實驗用時 | ２天 | ３天 | |
所需DNA量 | 低 | 高 | |
細胞數目調整 | 靈活 | 不靈活 | |
胰-酶消化 | 需要 | 需要 | |
適于高通量篩選 | +++++ | + | |
培養(yǎng)基的更換 | 取決于細胞系 | ||
一步法比兩步法節(jié)省24小時！
高性價比的高性能基因導入試劑
ScreenFect ™ 通信
基因導入人 iPS 細胞實驗數據
介紹使用 ScreenFect ™A plus 將基因導入人iPS細胞的實驗結果和操作步驟。本文記載了作為 iPS 細胞支架使用的 Matrigel 孔板包被方法、配制含有 Y-27632 的細胞懸浮液的操作步驟以及推薦的試劑比例，供您參考。
◆導入人iPS細胞（201B7株）的轉染操作實例
在這里，我們將介紹一些使用 StemSure® hPSC 培養(yǎng)基Δ（產品編號：197-17571）的操作實例。該操作步驟的完整版和使用 mTeSR1 培養(yǎng)基的操作步驟，請與富士膠片和光聯系獲取。
<轉染試劑的配制>
將 2.0 μL 的 ScreenFect ™ A plus reagent、4.0 μg 的質粒 DNA 加入到 160 μL 的 Opti-MEM 中制成 DNA-lipid complex。
< Matrigel 包被孔板>
1. ４°C下溶解 Matrigel hESC-Qualified Matrix 。為防止發(fā)生凝固，請避免在室溫下溶解。
2. 用 25 mL 冷卻的 D-MEM/Ham's F-12 稀釋 300μL 的 Matrigel。
3. 稀釋后的 Matrigel 溶液按照 1 mL/well 加入到 12 孔板中。
4. 在室溫下孵育１小時以上。
<細胞懸液的配制>
1. 將 StemSure® hPSC 培養(yǎng)基Δ在 2-8℃ 下放置數小時或過夜緩慢融解。不要在 37° C下解凍，并在一周內使用。
2. 將 bFGF（產品編號：064-05381,068-05384）按照終濃度 35-100ng/mL 添加到融解后的 StemSure® hPSC 培養(yǎng)基△中，配制成完-全培養(yǎng)基（以下稱為 sshPSC 培養(yǎng)基）。
3. 使用前將 sshPSC 培養(yǎng)基恢復至室溫。不要使用溫水浴。
4. 將 Y-27632 按照終濃度 10 μmol/L 添加到 sshPSC 培養(yǎng)基中（以下稱為 ROCKi+培養(yǎng)基）。
5. 去除 hiPS 細胞培養(yǎng)孔板中的培養(yǎng)基，用 PBS（-）清洗細胞一次。
*請在細胞匯片達到80％且處于對數增殖期時進行細胞轉染。
6. 除去 PBS（-），添加 Stempro Accutase。
7. 在 37°C，5％CO2 培養(yǎng)箱中靜置５分鐘。
8. 用 1 mL 微量移液槍添加 ROCKi+培養(yǎng)基，將細胞從培養(yǎng)板上分離并吹散成單細胞。
9. 轉移至 15 mL離心管中。
10. 室溫下 1000 rpm（約170×g）離心３分鐘。
11. 去除上清，用ROCKi+培養(yǎng)基重懸細胞。
12. 計算活細胞的數量。
13. 用 ROCKi+培養(yǎng)基將細胞濃度調整至 5×105 cells/mL。
<轉染>
添加 1 mL 配制好的 DNA-lipid complex 到細胞懸液中，使用移液器充分混勻，并接種在 12 孔板中。
※要點
接種 24 小時后請更換培養(yǎng)基。此時的培養(yǎng)基不需要含有 Y-27632。
◆實驗數據
通過反向轉染（1-STEP）將 GFP 融合基因導入 hiPS 細胞（201B7株），并通過熒光顯微鏡比較基因的導入效率。
<StemSure® hPSC 培養(yǎng)基Δ的使用>
細胞數：5×105 cells/well
質粒 DNA 量：4 μg/assay
轉染試劑混合比例：DNA 量（μg）：ScreenFect ™ A plus reagent (μL)=1 : 0.5
容器：12 孔板
備注：用 Opti-MEM 稀釋 ScreenFect ™ A plus reagent 和 DNA。
細胞數：5 x 105 cells/well
質粒 DNA 量：1 μg/assay
轉染試劑混合比例：DNA數量（μg）：ScreenFect ™ A plus reagent (μL)=1 : 2
容器：12 孔板
備注：用 Opti-MEM 稀釋 ScreenFect ™ A plus reagent 和 DNA。
◆使用上的注意
● 建議在單細胞狀態(tài)下進行人iPS細胞的基因導入。
● 建議基因導入時的細胞數約為 5×105 cells/well。
● 當質粒 DNA 量多時，導入基因的表達量高會引起細胞死亡。
【請聯系富士膠片和光獲取PDF】
◆Q＆A
Q1. 基因導入效率低怎么辦？
A1. 通過優(yōu)化DNA量和試劑用量可提高效率。另有優(yōu)化Protocol（日語版/英語版），可聯系富士膠片和光獲取。此外，使用ScreenFect™和SFA P-reagent（產
A1. 品編號：191-18331）也可提高基因導入效率。
Q2. 如何提高表達效率？
A2. 使用ScreenFect™和SFA P-reagent（產品編號：191-18331）可提高表達水平。
Q3. 轉染試劑對細胞毒性強怎么辦？
A3. 使用ScreenFect™和SFA P-reagent（產品編號：191-18331）可降低細胞毒性。
Q4. 從哪些條件實驗開始比較好？
A4. 可參考各ScreenFect™產品的快速Protocol（日語版/英語版），請聯系富士膠片和光獲取。
Q5. 轉染過程是否需要更換培養(yǎng)基？
A5. 更換培養(yǎng)基不是必須的，但在添加轉染試劑前更換新鮮的培養(yǎng)基可提高基因導入效率，改善細胞狀態(tài)。
Q6. 培養(yǎng)基中能否含有血清和抗生素？
A6. 根據細胞類型、DNA導入量等因素，可能需要更換培養(yǎng)基，以適時控制培養(yǎng)基含或不含血清/抗生素。請根據實驗用途進行討論。
Q7. 1-Step、2-Step是什么？
A7. 1-Step是一種反向轉染方法，即轉染前通過在細胞分離狀態(tài)下添加試劑來導入基因。
A7. 2-Step是一種正向轉染法，即提前一天進行細胞的預培養(yǎng)，然后在細胞上添加轉染試劑后導入基因。
Q8. 能否同時導入多個基因？
A8. 可以。請準備多種耐藥性基因，推薦使用pEBMulti 和 pCAG。
Q9. ScreenFect ™A和ScreenFect ™A plus分別適用于哪種情況？
A9. 通常情況下推薦使用基因導入效率高的ScreenFect ™A plus。但如果其對細胞毒性強或與ScreenFect™A plus相比無性能差異時，推薦使用細胞
A1. 毒性低且價格實惠的ScreenFect ™A。
Q10. 需要轉染siRNA時，推薦使用哪種ScreenFect ™？
A10. 可使用ScreenFect ™ siRNA。視情況，ScreenFect ™A plus也能有效轉染siRNA。使用ScreenFect ™siRNA無法達到預期結果時，可考慮
A11. 兩種試劑一同使用。
Q11. 需要轉染mRNA時，推薦使用哪種ScreenFect ™？
A11. 可使用ScreenFect ™mRNA。與SFA P-reagent一同使用時，可有效轉染mRNA，提高表達水平。
A11. 此外，ScreenFect ™A plus和SFA P-reagent共同使用的最適場景因細胞而異，部分情況下兩者共同使用能達到優(yōu)良效果。單獨使用
A11. ScreenFect ™mRNA無法達到預期結果時，可考慮上述兩種試劑一同使用。
Q12. SFA P-reagent是什么？
A12. 將質粒DNA或mRNA導入各種細胞時，SFA P-reagent和ScreenFect ™一同使用可提高細胞導入率和轉染分子的表達水平。此外，已確認添加
A11. SFA P-reagent還能顯著降低轉染試劑的細胞毒性。
Q13. 有在哪些細胞中的應用實例？
A13. 已在通用細胞系（HeLa、HepG2、MDCK、MCF-7、K562 等）、干細胞、造血細胞（巨噬細胞、THP-1、RAW264.7 等）、小膠質細胞、
A11. 原代細胞、昆蟲培養(yǎng)細胞、魚類培養(yǎng)細胞及其他細胞中實現基因導入。
A11. 更多詳情可查看優(yōu)化Protocol（日語版/英語版），歡迎聯系富士膠片和光獲取。
Q14. 是否可提供試用裝？
A14. 歡迎向我們聯系并填寫表格申請試用裝。
Q15. ScreenFect ™是什么試劑？
A15. ScreenFect ™是一種由新型陽離子脂質體構成的轉染試劑。
Q16. 冷凍存儲會對產品性能有影響嗎？
A16. 請勿使用冷凍后的產品。
Q17. 如何調整所用的質粒DNA？
A17. 推薦使用陰離子交換柱或氯化銫密度梯度離心法純化的質粒DNA。
Q18. 血清會影響基因導入嗎？
A18. 血清不會影響本產品的性能，但建議轉染時避免使用EDTA 和硫酸葡聚糖等陰離子抑制劑。此外，轉染時避免使用抗生素也可提高轉染效率。
◆參考文獻
[1] | Diefenbacher, Markus E., et al. "The LIM Domain Protein nTRIP6 Recruits the Mediator Complex to AP-1-Regulated Promoters." PLoS ONE 9.5 (2014): e97549. |
[2] | Freise, Christian, and Uwe Querfeld. "Inhibition of vascular calcification by block of intermediate conductance calcium-activated potassium channels with TRAM-34." Pharmacological Research (2014). |
[3] | Hagiwara, Akane, et al. "Luteinizing Hormone-Induced Expression of Ptger4b, a Prostaglandin E2 Receptor Indispensable for Ovulation of the Medaka Oryzias latipes, Is Regulated by a Genomic Mechanism Involving Nuclear Progestin Receptor." |
[4] | Peng, Yanyan, Ruidan Xu, and Xiaofeng Zheng. "HSCARG Negatively Regulates the Cellular Antiviral RIG-I Like Receptor Signaling Pathway by Inhibiting TRAF3 Ubiquitination via Recruiting OTUB1." PLoS pathogens 10.4 (2014): e1004041. (3) |
[5] | Wakimoto, Hiroaki, et al. "Targetable signaling pathway mutations are associated with malignant phenotype in IDH-mutant gliomas." Clinical Cancer Research (2014). (2) |
[6] | Fischer, Simon, et al. "Breaking limitations of complex culture media: Functional non-viral miRNA delivery into pharmaceutical production cell lines." Journal of biotechnology 168.4 (2013): 589-600. |
[7] | Bai, Dongmei, et al. "Regulation of the HDM2-p53 pathway by ribosomal protein L6 in response to ribosomal stress." Nucleic acids research 42.3 (2014): 1799-1811. |
[8] | Liu, Xing, et al. "Isocitrate dehydrogenase 2 mutation is a frequent event in osteosarcoma detected by a multi‐specific monoclonal antibody MsMab‐1." Cancer medicine 2.6 (2013): 803-814. |
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