BINKIT^® NK細(xì)胞擴增套裝（外周血單核細(xì)胞來源）

◆原理

　　BINKIT^® 可從外周血單核細(xì)胞擴增高活性的自然殺傷（NK）細(xì)胞。

◆優(yōu)點?特色

●無需飼養(yǎng)層細(xì)胞，即可從外周血細(xì)胞 (PBMCs)中擴增NK細(xì)胞

●3周時間內(nèi)NK細(xì)胞的數(shù)目可擴增幾百到幾千倍

●NK細(xì)胞將獲得增強的細(xì)胞殺傷性

●該試劑盒適合20~50 mL的外周血細(xì)胞

●Xeno-free（不含動物來源的材料）

◆案例?應(yīng)用

<試劑盒組成>

●NK 細(xì)胞初始培養(yǎng)基

●NK細(xì)胞初始培養(yǎng)瓶

●NK細(xì)胞傳代培養(yǎng)基

●BINKIT^® 明細(xì)表(PDF格式)

<未提供材料>

●Ficoll 淋巴細(xì)胞分層液（GE Healthcare）

●無菌PBS

●FBS或自體血漿（56℃加熱30分鐘以滅活）

<結(jié)果>

圖 1 使用BINKIT^® 進(jìn)行體外NK細(xì)胞擴增

利用BINKIT^® 對外周血單核細(xì)胞進(jìn)行NK細(xì)胞擴增，CD3-CD56+細(xì)胞從15.8％增加到88.6％。

圖 2 使用BINKIT^® 進(jìn)行體外NK細(xì)胞擴增

利用BINKIT^® 對外周血單核細(xì)胞（來自健康自愿者，HD, n=3）進(jìn)行NK細(xì)胞擴增。

細(xì)胞計數(shù)（左）和倍率的變化（右）表明NK細(xì)胞體在外高效擴增。

圖3  使用BINKIT^® 進(jìn)行體外NK細(xì)胞擴增

分別以BINKIT擴增的NK細(xì)胞（實線）和從3名志愿者新鮮分離的NK細(xì)胞（虛線）來檢測NK細(xì)胞對K562細(xì)胞的殺傷性。

結(jié)果表明，擴增后的NK細(xì)胞對K562細(xì)胞殺傷性顯著增強（P<0.01）。

<培養(yǎng)步驟>

(1) 準(zhǔn)備試劑

在NK細(xì)胞初始培養(yǎng)基和NK細(xì)胞傳代培養(yǎng)基中，加入5% (v/v) 的熱滅活FBS或自體血漿。

(2) 制備外周血單核細(xì)胞（PBMCs）

通過Ficoll密度梯度離心，從人全血中分離外周血單核細(xì)胞。

(3)清洗NK細(xì)胞初始培養(yǎng)瓶

加入10 mLPBS至NK細(xì)胞初始培養(yǎng)瓶。傾斜培養(yǎng)瓶使PBS覆蓋整個表面。

將培養(yǎng)瓶中液體全部倒出，小心以免刮傷培養(yǎng)瓶的表面。重復(fù)洗滌過程兩次。

(4)從PBMCs中培養(yǎng)NK細(xì)胞

將1×10⁶ cells/mL 的PBMCs 懸浮于NK細(xì)胞初始培養(yǎng)基中。每1 mL 細(xì)胞懸浮液加入40 μL的NK細(xì)胞初始混合物。

細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至預(yù)洗滌的NK細(xì)胞初始培養(yǎng)瓶，在37℃，5％的CO₂培養(yǎng)3天。

(5)更換培養(yǎng)基及傳代

同貼壁細(xì)胞處理一樣，轉(zhuǎn)移時置于錐形離心管，200×g離心8分鐘。

去除上清，將1×10⁶ cells/mL 的NK細(xì)胞懸浮于傳代培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基內(nèi)加入5 mL

轉(zhuǎn)移后的懸浮細(xì)胞置于常規(guī)培養(yǎng)瓶中，在37℃，5％ CO₂條件下培養(yǎng)。

每2-3天將 0.8×10⁶ cells/mL 細(xì)胞置于*NK細(xì)胞傳代培養(yǎng)基中，進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

<建議培養(yǎng)期>

2-3 周

注意：試劑僅供科研使用，不可用于臨床。 

BINKIT^® NK細(xì)胞擴增套裝（外周血單核細(xì)胞來源）