CYTO-ID^® Autophagy Detection Kit使用新型染料檢測自噬小泡和監(jiān)控活細胞自噬流，選擇性標記積累的自噬小泡。染料已通過優(yōu)化，不染溶酶體，在自噬前體、自噬體和自噬溶酶體里呈現(xiàn)出明亮的熒光。該試劑盒提供了一種無需細胞轉(zhuǎn)染，可以在活細胞中監(jiān)控細胞自噬的快速定量方法。

　　胞內(nèi)物質(zhì)被擴大的膜囊包裹，吞噬泡形成雙層膜囊泡，成為自噬體。自噬體外膜隨后與溶酶體融合，和內(nèi)部物質(zhì)被自噬性溶酶體降解。自噬的各種調(diào)節(jié)因子也被描繪于圖中。

?

自噬原理圖

省時省力，無需轉(zhuǎn)染即可自快速全面的標記自噬小泡

　　為了演示CYTO-ID^® Green detection reagent的優(yōu)勢，先用RFP-LC3表達載體轉(zhuǎn)染HeLa細胞， 10μM的Tamoxifen處理過夜，然后用CYTO-ID^® 綠色檢測試劑染色。LC3轉(zhuǎn)染法需要過夜，而CYTO-ID^® 綠色檢測試劑的方法在15-30分鐘內(nèi)標記細胞達100％。圖A：綠信號顯示自噬小泡的CYTO-ID?^® 綠染;圖B：成功轉(zhuǎn)染細胞的RFP-LC3表達（紅色）;圖C：自噬體的特異性標記LC3，與CYTO-ID^® 綠色染料標記的小泡共定位的復合圖像。

無轉(zhuǎn)染的自噬檢測

　　Hela細胞進行饑餓與恢復，然后使用CYTO-ID^® Green detection reagent標記。染料可以明確檢測和量化自噬及與自噬誘導相關的自噬小泡前體。圖1A：穩(wěn)定表達GFP-LC3的CHO細胞，結(jié)果顯示對照組與饑餓的細胞群的相對較差的基線分離，自噬難以量化。圖1B：CYTO-ID^® Autophagy Detection Kit特異性標記LC3蛋白依賴的自噬小泡，免去轉(zhuǎn)染操作。

自噬積累和自噬流的可視化

　　可用熒光顯微鏡觀察CYTO-ID^® 自噬綠色染料檢測的自噬液泡積累和自噬流。Hela細胞用以下試劑進行模擬誘導，0.2% DMSO（A）和100μM  Clonidine hydrochloride（B）進行誘導，5μM Loperamide hydrochloride和1 μM PP242 hydrate（D）在37°C誘導12小時。處理后，細胞在37℃下用CYTO-ID^® Green Detection reagent孵育10分鐘，再用分析緩沖液清洗。細胞核被Hoechst 33342染料復染為藍色。

避免非特異性溶酶體染色的背景干擾

　　相比其他MDC染色溶酶體檢測，CYTO-ID^® 綠色染料無溶酶體染色背景，CYTO-ID^® Autophagy kit無需紫外活細胞分析，在顯微鏡共標記應用中，與Hoechst染料兼容。

使用流式細胞儀通過CYTO-ID^® Autophagy Detection Kit分析自噬

　　對照組（紅線峰值）無誘導，10 uM Tamoxifen (ALX-550-095)處理Jurkat細胞（白血病T細胞）（藍線峰值）。處理18小時后，細胞結(jié)合CYTO-ID^® 綠色檢測試劑，然后不經(jīng)過流式細胞儀清洗，進行分析。結(jié)果通過直方圖呈現(xiàn)。對照組細胞被染色，但熒光亮度低。實驗組中，CYTO-ID^® 綠色熒光信號增加約2倍，表明Tamoxifen處理能引起Jurkat細胞中自噬的增加。

　　使用mTOR激酶抑制劑Rapamycin處理HepG2細胞孵育過夜，結(jié)果顯示CYTO-ID^® 染色信號升高。

CYTO-ID^® 綠色染料大多與RFP-LC3蛋白共定位。0.1μM Rapamycin（典型自噬誘導劑）處理過夜，轉(zhuǎn)染Hela細胞表達RFP-LC3。A: CYTO-ID^® Green染色； B: RFP-LC3； C: 合成圖像。

產(chǎn)品編號

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

備注

應用

ENZ-51002-25

細胞凋亡/壞死檢測試劑盒

25 assays

多重檢測，區(qū)分正常、

早期凋亡、晚期凋亡和壞死細胞，與GFP和其他綠色熒光探針兼容。

FC，熒光顯微鏡，熒光檢測

ENZ-51002-100

100 assays

ENZ-51021-K200

細胞核綠色染色體皺縮檢測試劑盒

1 Kit

高滲透性的綠色熒光染色增強了細胞凋亡誘導染色質(zhì)固縮。

FC，熒光顯微鏡，熒光檢測

ENZ-52406

DNA染色試劑盒（紅色熒光）

200 µl

細胞可滲透的DNA染色應用廣泛。

≥93％（HPLC），F(xiàn)C，熒光檢測

ENZ-CHM103-0200

Nuclear ID^® 藍色DNA染色（GFP細胞系）

200 µL

細胞可滲透的DNA染色應用廣泛。

≥93％（HPLC），F(xiàn)C，熒光檢測

ENZ-51015-KP002

溶酶體細胞毒理檢測試劑盒（紅色熒光）（綠色細胞系）

1 Kit

快速，定量和HTS-兼容的檢測活細胞毒性試劑。

熒光顯微鏡，熒光檢測

ENZ-51035-0025

蛋白內(nèi)穩(wěn)態(tài)^® 聚集體 檢測 試劑盒

25 tests

Robust、定量的聚集小體用于神經(jīng)退行性疾病，肝病和毒理學研究

FC，熒光顯微鏡，熒光檢測

ENZ-51035-K100

100 tests